Μελέτη της ρύθμισης της L-Dopa αποκαρβοξυλάσης

Διδακτορική Διατριβή uoadl:1309106 493 Αναγνώσεις

Μονάδα:
Τομέας Βιοχημείας Μοριακής Βιολογίας
Βιβλιοθήκη Σχολής Θετικών Επιστημών
Ημερομηνία κατάθεσης:
2012-10-02
Έτος εκπόνησης:
2012
Συγγραφέας:
Χαλατσά Ιωάννα
Στοιχεία επταμελούς επιτροπής:
Διδώ Βασιλακοπούλου Αναπλ. Καθηγ., Εμμανουήλ Γ. Φραγκούλης Καθηγ., Διαμάντης Σίδερης Αναπλ. Καθηγ.
Πρωτότυπος Τίτλος:
Μελέτη της ρύθμισης της L-Dopa αποκαρβοξυλάσης
Γλώσσες διατριβής:
Ελληνικά
Περίληψη:
Η L-3,4 διυδροξυ-φαινυλ-αλανίνη αποκαρβοξυλάση (L-Dopa αποκαρβοξυλάση, L-Dopa
decarboxylase ή DDC, EC 4.1.1.26) είναι το ένζυμο το οποίο καταλύει την
αποκαρβοξυλίωση της L-Dopa σε ντοπαμίνη. Σκοπός της παρούσας διατριβής ήταν η
μελέτη της ρύθμισης της L-Dopa αποκαρβοξυλάσης (DDC).
Ο πρώτος άξονας των πειραματικών προσεγγίσεων αφορούσε στη μελέτη της ρύθμισης
έκφρασης της DDC και της κυτταρικής τοπολογίας της πλήρους μήκους DDC, της
εναλλακτικής ισομορφής Αlt-DDC και του φυσικού αναστολέα Aννεξίνη V σε
κυτταρικές σειρές νευρικής και μη νευρικής προέλευσης. Λόγω του εντοπισμού της
DDC και της Alt-DDC σε όλες τις φάσεις διαχωρισμού στις υπό μελέτη κυτταρικές
σειρές ακολούθησε περαιτέρω διερεύνηση του φαινομένου αυτού, μελετώντας της
πιθανότητα απελευθέρωσης της DDC από το μεμβρανικό κλάσμα στα κύτταρα ΗΕΚ-293.
Η διαλυτοποίηση των μεμβρανοσυνδεόμενων μορίων της DDC βρέθηκε ότι εξαρτάται
από τη επίδραση του pH, το χρόνο επώασης και τις συγκεντρώσεις δισθενών
κατιόντων και αναστολέων πρωτεασών κυστεΐνης και σερίνης. Επιπλέον, βρέθηκε ότι
ένα μέρος των μεμβρανοσυνδεόμενων μορίων απελευθερώνεται στο διαλυτό κλάσμα,
υποδεικνύοντας έναν πιθανό μηχανισμό για τη ρύθμιση της ενζυμικής ενεργότητας
του μορίου. Στα πλαίσια της ρύθμισης της έκφρασης και της ενζυμικής ενεργότητας
της DDC, διερευνήθηκαν οι αλληλεπιδράσεις του ενζύμου με άλλα μόρια, καθώς με
τον τρόπο αυτό μπορούν να προκύψουν σημαντικά συμπεράσματα ως προς τον τρόπο
δράσης του, αλλά και τους παράγοντες που αναστέλλουν την ενεργότητά του. Η
μελέτη του τρόπου δράσης των ενδογενών και χημικών αναστολέων της DDC θεωρείται
πολύ σημαντική για τη κατανόηση της ρύθμισης του ενζύμου. Για το λόγο αυτό,
στην παρούσα εργασία πραγματοποιήθηκε επίδραση χημικών αναστολέων της ενζυμικής
ενεργότητας της DDC και του ενδογενούς αναστολέα της που έχει απομονωθεί από
ανθρώπινο ορό, σε κυτταρικές σειρές μη νευρικής προέλευσης. Για την περαιτέρω
μελέτη του φαινομένου, σχεδιάστηκε η μελέτη της αλληλεπίδρασης της DDC και της
Αlt-DDC με την Aννεξίνη V σε ευκαρυωτικό σύστημα CHO κυττάρων (Chinese Hamster
Ovary cells).
Η DDC εμπλέκεται σε παθολογικές καταστάσεις, όπως στη νόσο του Parkinson, τον
καρκίνο και τη σχιζοφρένεια. Για τους παραπάνω λόγους, η μελέτη της ρύθμισης
της DDC παρουσιάζει ιδιαίτερο ενδιαφέρον, διότι θα μπορούσε να συμβάλλει σε
νέες πειραματικές προσεγγίσεις, οι οποίες θα έχουν ως τελικό στόχο την ανάπτυξη
νέων φαρμακολογικών και θεραπευτικών μέσων για την καταπολέμηση
νευροεκφυλιστικών και νεοπλασματικών νόσων.
Λέξεις-κλειδιά:
L-Dopa αποκαρβοξυλάση, Αννεξίνη V, Μεμβράνες, Διαλυτοποίηση, Απόπτωση
Ευρετήριο:
Ναι
Αρ. σελίδων ευρετηρίου:
3-8
Εικονογραφημένη:
Ναι
Αρ. βιβλιογραφικών αναφορών:
200
Αριθμός σελίδων:
187