Επιβίωση και προσκόλληση αδιαφοροποίητων μεσεγχυματικών κυττάρων οδοντικού πολφού στην επιφάνεια βιοεπαγωγικών υλικών

Διπλωματική Εργασία uoadl:1315279 681 Αναγνώσεις

Μονάδα:
Κατεύθυνση Ενδοδοντία (Κλινικές Ειδικεύσεις)
Βιβλιοθήκη Οδοντιατρικής
Ημερομηνία κατάθεσης:
2015-10-28
Έτος εκπόνησης:
2015
Συγγραφέας:
Φιλιππάτος Χρίστος
Στοιχεία επιβλεπόντων καθηγητών:
Αγραφιώτη Αναστασία, Λέκτορας Ενδοδoντίας ΕΚΠΑ, Κοντακιώτης Ευάγγελος, Αναπληρωτής Καθηγητής Ενδοδοντίας ΕΚΠΑ, Χαμπάζ Μαρουάν, Καθηγητής Ενδοδοντίας ΕΚΠΑ
Πρωτότυπος Τίτλος:
Επιβίωση και προσκόλληση αδιαφοροποίητων μεσεγχυματικών κυττάρων οδοντικού πολφού στην επιφάνεια βιοεπαγωγικών υλικών
Γλώσσες εργασίας:
Ελληνικά
Περίληψη:
Εισαγωγή: Την ολοκλήρωση του πρωτοκόλλου απολύμανσης της πολφικής κοιλότητας
στις αναγεννητικές τεχνικές ακολουθεί η πρόκληση αιμορραγίας και ο σχηματισμός
αιματικού θρόμβου 3-4 mm κάτω από το επίπεδο της αδαμαντινοοστεϊνικής ένωσης.
Πάνω από τον αιματικό θρόμβο τοποθετείται συνήθως κάποιο βιοεπαγωγικό υλικό σε
πάχος μερικών χιλιοστών, και ακολουθεί η μόνιμη αποκατάσταση του δοντιού. Η
επιλογή του υλικού έμφραξης του αυχενικού τριτημορίου του ριζικού σωλήνα στις
αναγεννητικές τεχνικές αποτελεί έναν από τους σημαντικούς παράγοντες που
επιδρούν στην επιτυχία της τεχνικής, καθώς το υλικό αυτό έρχεται σε επαφή με
πλήθος βλαστικών κυττάρων που βρίσκονται εντός του αιματικού θρόμβου. Το ΜΤΑ
είναι το υλικό που επιλέγεται για το σκοπό αυτό στη συντριπτική πλειοψηφία των
κλινικών άρθρων σχετικών με τις αναγεννητικές τεχνικές, γεγονός που οφείλεται
αφενός στην υψηλή εμφρακτική του ικανότητα, αφετέρου στις αξιοσημείωτες
βιολογικές του ιδιότητες. Το 2012, η εταιρία CERKAMED εισήγαγε στην
οδοντιατρική αγορά το ΜΤΑ+Cerkamed, το οποίο σύμφωνα με τους κατασκευαστές
συνδυάζει μεγάλη ευκολία στους χειρισμούς, υψηλές μηχανικές ιδιότητες, υψηλή
εμφρακτική ικανότητα, υψηλή τιμή pH και σχετικά χαμηλή τιμή κόστους. Το
TotalFill BC RRM σε στοκώδη σύσταση (Putty) αποτελεί ένα βιοκεραμικό υλικό με
χημική σύνθεση, φυσικομηχανικές και βιολογικές ιδιότητες παρόμοιες με των
υπολοίπων. Περιέχει στη σύνθεσή του πυριτικό τριασβέστιο, πυριτικό διασβέστιο,
υδροξείδιο του ασβεστίου, οξείδιο του ζιρκονίου και πεντοξειδίου του τανταλίου.
Παρουσιάζει χαμηλή διαλυτότητα, ικανοποιητικές μηχανικές ιδιότητες, υψηλή τιμή
pH, υψηλή ακτινοσκιερότητα και υψηλή εμφρακτική ικανότητα. Σημαντικό
πλεονέκτημα έναντι του ΜΤΑ αποτελεί το γεγονός ότι πρόκειται για προ-
αναμεμειγμένο υλικό, έτοιμο προς χρήση με αποτέλεσμα την ευκολία στους
χειρισμούς, τη σταθερή σύσταση που επιτυγχάνεται με τα υλικό αυτό και την
ελάχιστη απώλεια υλικού κατά τη χρήση του. Μέχρι στιγμής, ελλιπή κρίνονται τα
βιβλιογραφικά δεδομένα για τις βιολογικές ιδιότητες τόσο του TotalFill BC RRM
όσο και του ΜΤΑ+Cerkamed.
Σκοπός: H αξιολόγηση της βιοσυμβατότητας του TotalFill BC RRM Putty και του
ΜΤΑ+Cerkamed και η σύγκρισή της με την αντίστοιχη του ProRoot MTA, μέσω
αξιολόγησης: α) της βιωσιμότητας αδιαφοροποίητων μεσεγχυματικών κυττάρων από
τον οδοντικό πολφό νεογιλών δοντιών (SHED) παρουσία των υλικών αυτών και β) της
προσκόλλησης των κυττάρων στην επιφάνεια των υλικών με χρήση συνεστιακού
μικροσκοπίου.
Υλικά και Μεθοδολογία: Αδιαφοροποίητα μεσεγχυματικά κύτταρα από οδοντικό πολφό
νεογιλών δοντιών (SHED) εξασφαλίστηκαν από την ProCell, Biotechnological
Application SA. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium
(DMEM) με προσθήκη 10% απενεργοποιημένου με θέρμανση βόειου εμβρυικού ορρού,
εμπλουτισμένου με στρεπτομυκίνη, πενικιλλίνη και L-γλουταμίνη σε συνθήκες 37ο C
και 5% CO2. Τα βλαστικά κύτταρα που χρησιμοποιήθηκαν ήταν μεταξύ του 3ου και
5ου περάσματος. Τα υλικά TotalFill BC RRM-Putty, ΜΤΑ+Cerkamed και ProRoot MTA
παρασκευάστηκαν, τοποθετήθηκαν σε καλυπτρίδες διαμέτρου 13 χιλιοστών όπου και
αφέθηκαν να πήξουν για 2 ώρες σε συνθήκες θερμοκρασίας 37ο C και 100% υγρασίας.
Ακολούθως, μεταφέρθηκαν στον πυθμένα wells (θαλάμων) ενός 24-well plate μαζί με
300 μl DMEM. Την ομάδα ελέγχου αποτελούσαν καλυπτρίδες χωρίς κάποιο υλικό. Η
βιωσιμότητα των κυττάρων παρουσία των τριών ενδοδοντικών υλικών μελετήθηκε
χρησιμοποιώντας transwells, τα οποία προσαρμόστηκαν στα wells. Σε κάθε
transwell μεταφέρθηκαν 104 κύτταρα μαζί με 300 μl DMEM, τα οποία και παρέμειναν
στην πολυκαρβονική πορώδη μεμβράνη. Δεν υπήρχε δυνατότητα διαφυγής των κυττάρων
μέσω των πόρων της μεμβράνης. Τα κύτταρα επωάστηκαν για 72 ώρες, συλλέχτηκαν
μετά από επεξεργασία με τρυψίνη, αναδιαλύθηκαν σε διάλυμα Trypan Blue και
προσδιορίστηκε ο αριθμός τους με χρήση κλασσικής κυτταρομετρίας (Neubauer). Η
παραπάνω διαδικασία πραγματοποιήθηκε 4 φορές για κάθε ομάδα,
συμπεριλαμβανομένου και της ομάδας ελέγχου. Για τη διερεύνηση πιθανών διαφορών
μεταξύ των υλικών σε όλους τους μεταξύ τους συνδυασμούς πραγματοποιήθηκε μη
παραμετρική δοκιμασία Kruskal Wallis και δοκιμασία Mann-Whitney U. Ως επίπεδο
στατιστικής σημαντικότητας ορίσθηκε το 0.05. Η ανάλυση των αποτελεσμάτων έγινε
το πρόγραμμα SPSS-IBM, v.21.0. Για την αξιολόγηση της μορφολογίας των κυττάρων
στην επιφάνεια των υλικών χρησιμοποιήθηκαν 12 μονόρριζοι προγόμφιοι από άτομα
νεαρής ηλικίας, οι οποίοι εξήχθηκαν για ορθοδοντικούς λόγους. Από τη ρίζα του
κάθε δοντιού συλλέχτηκαν τμήματα μήκους 3 mm. Η παρασκευή του τμήματος του
ριζικού σωλήνα έγινε με G.G. No 4 (110 μm). Το δείγμα χωρίστηκε σε 3 ομάδες ( 4
δείγματα για την κάθε ομάδα υλικού). Τα δείγματα μεταφέρθηκαν σε ένα 24-well
plate, και σε κάθε well τοποθετήθηκαν 2,5Χ104 κύτταρα, τα οποία επωάστηκαν για
72 ώρες. Τα δείγματα μονιμοποιήθηκαν και ακολούθησε χρώση τους με διάλυμα Φαλοϊ
δίνης-Ροδαμίνης για αξιολόγηση του κυτταροπλάσματος και με διάλυμα 4’
,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) για την καταγραφή των πυρήνων. Ακολούθησε
παρατήρησή τους σε συνεστιακό μικροσκόπιο με τη χρήση του Leica software, LAS
AF.
Αποτελέσματα: Ο αριθμός των κυττάρων, εκφραζόμενος ως % της ομάδας ελέγχου,
ήταν 240%, 100% και 140% για τα υλικά TotalFill BC RRM, ΜΤΑ+Cerkamed και
ProRoot MTA, αντίστοιχα. Στατιστικά σημαντική διαφορά σημειώθηκε μεταξύ του
TotalFill BC RRM και οποιαδήποτε άλλης ομάδας (συμπεριλαμβανομένης και της
ομάδας ελέγχου) (p<.05). Δε σημειώθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ
ΜΤΑ+Cerkamed και ομάδας ελέγχου (p>.05). Υπό το συνεστιακό μικροσκόπιο τα
κύτταρα τόσο στην επιφάνεια του ProRoot ΜΤΑ όσο και στην επιφάνεια του
TotalFill BC παρουσιάζονταν πολυάριθμα, ατρακτοειδούς σχήματος, έχοντας
εκτενείς, λεπτές κυτταροπλασματικές αποφυάδες. Αντίθετα, στην επιφάνεια του
ΜΤΑ+Cerkamed τα κύτταρα παρουσιάζονταν αραιά, πιο αποστρογγυλεμένα έχοντας
ελάχιστες κυτταρικές αποφυάδες.
Συμπεράσματα: Πολύ υψηλά επίπεδα βιωσιμότητας κυττάρων καταγράφηκαν για το
TotalFill BC RRM. Ικανοποιητικό και αποδεκτό επίπεδο βιωσιμότητας κυττάρων
καταγράφηκε και για το ΜΤΑ+Cerkamed. Η επιφάνεια του ΜΤΑ+Cerkamed παρουσιάστηκε
λιγότερο φιλική για την προσκόλληση των βλαστικών κυττάρων. Ο υψηλός δείκτης
βιοσυμβατότητας για το βιοκεραμικό υλικό ενθαρρύνει τη χρησιμοποίηση αυτού στην
καθημερινή κλινική πράξη.
Λέξεις-κλειδιά:
Βιοσυμβατότητα, ProRoot ΜΤΑ, MTA+Cerkamed, Αναγεννητική Ενδοδοντία, Βλαστικά κύτταρα
Ευρετήριο:
Όχι
Αρ. σελίδων ευρετηρίου:
0
Εικονογραφημένη:
Ναι
Αρ. βιβλιογραφικών αναφορών:
188
Αριθμός σελίδων:
116
Αρχείο:
Δεν επιτρέπεται η πρόσβαση στο αρχείο.

document.pdf
5 MB
Δεν επιτρέπεται η πρόσβαση στο αρχείο.