Μονάδα:
ΠΜΣ Μικροβιακή ΒιοτεχνολογίαΒιβλιοθήκη Σχολής Θετικών Επιστημών
Ημερομηνία κατάθεσης:
2015-10-09
Συγγραφέας:
Μάνος Νικόλαος
Στοιχεία επιβλεπόντων καθηγητών:
Αμαλία Καραγκούνη Καθηγήτρια, Γιώργος Διαλλινάς Καθηγητής, Δημήτρης Χατζινικολάου Επίκ. Καθηγητής (Επιβλέπων)
Πρωτότυπος Τίτλος:
"Ετερόλογη έκφραση και χαρακτηρισμός μίας λακκάσης του θερμόφιλου μύκητα Myceliopthora thermophila - χρήση της σε εφαρμογές βιοτεχνολογικού ενδιαφέροντος"
Γλώσσες εργασίας:
Ελληνικά
Μεταφρασμένος τίτλος:
"Heterologous expression and characterization of a laccase of the thermophilic fungus Myceliopthora thermophila - use in applications of biotechnological interest"
Περίληψη:
Οι λακκάσες (EC 1.10.3.2) αποτελούν μία οικογένεια οξειδοαναγωγικών ενζύμων τα
οποία καταλύουν την οξείδωση αρωματικών ενώσεων με ταυτόχρονη αναγωγή του
οξυγόνου σε νερό. Λόγω των ιδιοτήτων τους όπως η χημική σταθερότητα, η
ικανότητα κατάλυσης αναβολικών και καταβολικών διεργασιών αλλά και η οικολογική
φύση της αντίδρασης παρουσιάζουν μεγάλο εύρος εφαρμογών στη βιοτεχνολογία. Ο
Myceliopthora thermophila είναι ένας θερμόφιλος μύκητας ο οποίος αποικοδομεί
ταχύτατα την κυτταρινούχο βιομάζα, γεγονός που οφείλεται στα ισχυρά ενζυμικά
συστήματα που διαθέτει (ενδογλουκανάσες, εξωγλουκανάσες, λακκάσες, ξυλανάσες
κλπ.). Ο συγκεκριμένος μύκητας έχει μεγάλη σημασία για τη βιοτεχνολογία διότι
από αυτόν έχει απομονωθεί ενας μεγάλος αριθμός ενζύμων που βρίσκουν εφαρμογή
στη βιομηχανία. Στη συγκεκριμένη εργασία έγινε προσπάθεια ετερόλογης έκφρασης
μίας λακκάσης του Myceliopthora thermophila χρησιμοποιώντας το σύστημα της
μεθυλότροφης ζύμης Pichia pastoris. Το γονίδιο που επιλέχτηκε προς ανάλυση είχε
συνολικό μέγεθος 2093 ζ.β. και οργανώνεται σε 3 εξόνια μεγέθους 258, 1498, 197
ζ.β. τα οποία διακόπτονται από 2 ιντρόνια μεγέθους 58 και 82 ζ.β. Η αφαίρεση
των ιντρονίων έγινε χρησιμοποιώντας τη μέθοδος της επικαλυπτόμενης αντίδρασης
PCR. Ακολούθησε ενσωμάτωση του γονιδίου σε κατάλληλο φορέα έκφρασης και
μετασχηματισμός κυττάρων της ζύμης Pichia pastoris. Η πρωτεΐνη που απομονώθηκε
από την ετερόλογη έκφραση στα κύτταρα της ζύμης εξετάστηκε για την ικανότητα
οξείδωσης του χημικού μορίου ABTS και του ασκορβικού οξέος. Στον τομέα των
βιοτεχνολογικών εφαρμογών επιλέχθηκε η χρήση της εμπορικά διαθέσιμης λακκάσης
του Myceliopthora thermophila για τον πολυμερισμό ορισμένων αρωματικών ενώσεων.
Εξετάστηκε το σύνολο των παραγόντων που επηρεάζουν την αντίδραση όπως η
αναλογία ενζύμου-υποστρώματος, η θερμοκρασία, το pH και ο χρόνος. Η αξιολόγηση
των πολυμερών έγινε με λήψη φασμάτων στο ορατό-υπεριώδες αλλά και λήψη φασμάτων
στο υπέρυθρο.
Λέξεις-κλειδιά:
Myceliopthora thermophila, Ετερόλογη έκφραση, Επικαλυπτόμενη PCR, Λακκάσες, Πολυμερισμός φαινολικών ενώσεων
Αρ. σελίδων ευρετηρίου:
0
Αρ. βιβλιογραφικών αναφορών:
65
