Μονάδα:
ΠΜΣ Μικροβιακή ΒιοτεχνολογίαΒιβλιοθήκη Σχολής Θετικών Επιστημών
Ημερομηνία κατάθεσης:
2012-04-11
Συγγραφέας:
Σκαμάκη Καλλιόπη
Στοιχεία επιβλεπόντων καθηγητών:
Επικ. Καθηγητής Ανδρέας Ρούσσης (επιβλέπων), Επικ. Καθηγητής Κοσμάς Χαραλαμπίδης, Καθηγήτρια Αμαλία Καραγκούνη-Κύρτσου
Πρωτότυπος Τίτλος:
Αβιοτικές καταπονήσεις στο Arabidopsis thaliana: Διερεύνηση του ρόλου των γονιδίων sbp (selenium binding protein) και ανάπτυξη ενός μοριακού εργαλίου για τον in planta ανοσοεντοπισμό τους.)
Γλώσσες εργασίας:
Ελληνικά
Περίληψη:
Ο σκοπός αυτής της διπλωματικής εργασίας ήταν η μελέτη της έκφρασης των
γονιδίων sbp (sbp 1/2/3) του Arabidopsis thaliana σε συνθήκες καταπόνησης από
βαρέα μέταλλα. Επίσης, η μελέτη των αλληλεπιδράσεων και του υποκυτταρικού
εντοπισμού των πρωτεϊνών SBP. Σε προηγούμενες μελέτες με χρήση μικροσυστοιχιών
DNA έχει βρεθεί ότι τα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων sbp αλλάζουν όταν τα φυτά
εκτίθεται σε διάφορες βιοτικές και αβιοτικές καταπονήσεις. Επίσης, σε
προηγούμενη μελέτη έχει βρεθεί ότι φυτά που υπερεκφράζουν το γονίδιο sbp1 έχουν
αυξημένη ανθεκτικότητα σε υψηλές συγκεντρώσεις σεληνίου. Σε αυτή τη μελέτη
πραγματοποιήθηκε επίδραση διαφόρων συγκεντρώσεων βαρέων μετάλλων (χαλκού και
χρωμίου) σε αρτίβλαστα A.thaliana. Tα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων sbp
εκτιμήθηκαν με χρήση της ημιποσοτικής αλυσιδωτής αντίδρασης αντίστροφης
μεταγραφάσης-πολυμεράσης (semi-quantitative RT-PCR). Στις ίδιες συνθήκες
μελετήθηκαν και τα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων gapdh και fba που κωδικοποιούν
γλυκολυτικά ένζυμα, μία GAPDH και μία FBA, οι οποίες σε παλαιότερη μελέτη έχει
βρεθεί ότι αλληλεπιδρούν με την AtSBP1 in vivo και in vitro. Επιπρόσθετα, για
να δειχθεί η αλληλεπίδραση της πρωτεΐνης AtSBP1 με τις AtGAPDH και AtFBA και να
γίνει υποκυτταρικός εντοπισμός του συμπλόκου in planta χρησιµοποιήθηκε η
τεχνική της συµπληρωµατικότητας του διµοριακού φθορισµού (ΒiFC). Στα πλαίσια
μίας προσπάθειας μελέτης της έκφρασης και της λειτουργίας της πρωτεΐνης AtSBP1
in planta σε πραγματικό χρόνο αναπτύχθηκε ένα μοριακό εργαλείο που βασίζεται
στα θραύσματα αντισωμάτων VHH μέσω του οποίου έγινε υποκυτταρικός εντοπισμός
της AtSBP1. Συγκεκριμένα, χρησιμοποιήθηκαν VHHs που προέρχονται από βιβλιοθήκη
θραύσματων αντισωμάτων VHH που κατασκευάστηκε μετά από ανοσοποίηση Lama glama
με την πρωτεΐνη AtSBP1. Τα επιλεγμένα VHHs χρησιμοποιήθηκαν ως ένδο-αντισώματα
για γίνει ανοσοεντοπισμός της AtSBP1 in planta σε πραγματικό χρόνο. Για την
ανίχνευση των συμπλόκων των VHHs με την AtSBP1 χρησιμοποιήθηκε η τεχνολογία
συμπληρωματικότητας διμοριακού φθορισμού (BiFC).
Λέξεις-κλειδιά:
Selenium binding protein, Arabidopsis thaliana , Αβιοτικές καταπονήσεις , In planta ανοσοεντοπισμός, Θραύσματα αντισωμάτων VHH
Αρ. σελίδων ευρετηρίου:
4-5
Αρ. βιβλιογραφικών αναφορών:
167
