Ανάπτυξη και κλινική εφαρμογή μεθόδων ανίχνευσης μεταλλάξεων των γονιδίων BRAF και ESR1 με συνδυασμό ARMS-PCR και υψηλής διακριτικότητας ανάλυση καμπυλών τήξης DNA (HRMA)

Διπλωματική Εργασία uoadl:1316046 593 Αναγνώσεις

Μονάδα:
Κατεύθυνση Κλινική Χημεία
Βιβλιοθήκη Σχολής Θετικών Επιστημών
Ημερομηνία κατάθεσης:
2014-10-27
Έτος εκπόνησης:
2014
Συγγραφέας:
Τζανίκου Ελένη
Στοιχεία επιβλεπόντων καθηγητών:
Καθηγήτρια Ε.Κ.Π.Α. Ε. Λιανίδου (επιβλέπουσα), Αναπλ. Καθηγήτρια Πανεπιστημίου Πατρών Γ. Σωτηροπούλου, Επικ. Καθηγήτρια Ε.Κ.Π.Α. Α. Ψυρρή
Πρωτότυπος Τίτλος:
Ανάπτυξη και κλινική εφαρμογή μεθόδων ανίχνευσης μεταλλάξεων των γονιδίων BRAF και ESR1 με συνδυασμό ARMS-PCR και υψηλής διακριτικότητας ανάλυση καμπυλών τήξης DNA (HRMA)
Γλώσσες εργασίας:
Ελληνικά
Μεταφρασμένος τίτλος:
Development and clinical application of methods for mutations detection in BRAF and ESR1 combining ARMS-PCR and high resolution melting analysis (HRMA)
Περίληψη:
Η παρουσία σωματικών μεταλλάξεων (βιοδεικτών) στο γενετικό υλικό είναι άμεσα
συνδεδεμένη με την βιολογία του καρκίνου και συνεπώς η ανάπτυξη και εφαρμογή
μεθόδων, με σκοπό την ανίχνευσή τους είναι αναγκαία. Οι βιοδείκτες δημιουργούν
ένα ξεχωριστό γενετικό προφίλ στον ασθενή και στο οποίο η εξατομικευμένη
ιατρική (personalized medicine) στηρίζεται, ώστε να παρέχει τη σωστή θεραπεία
στον ασθενή τη σωστή χρονική στιγμή. Σκοπός της παρούσας εργασίας, είναι η
εφαρμογή και αξιολόγηση μιας μεθόδου ανίχνευσης της μετάλλαξης V600E στο
γονίδιο BRAF, η οποία χαρακτηρίζεται από υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα. Η
μεθοδολογία βασίζεται στη χρήση αλληλοειδικού εκκινητή για την μετάλλαξη που
μελετάμε και στη προσθήκη μη επισημασμένου ανιχνευτή, με σκοπό να παρεμποδίσει
την ενίσχυση του φυσιολογικού αλληλίου ενώ ταυτόχρονα δρα ανταγωνιστικά ως προς
τον ειδικό προς τη μετάλλαξη εκκινητή για την αύξηση της ευαισθησίας της
μεθόδου. Η μετάλλαξη V600EBRAF εμπλέκεται στην ανταπόκριση της θεραπείας
ασθενών προχωρημένου σταδίου μελάνωματος με BRAF αναστολείς και πιο
συγκεκριμένα με τον PLX4032 αναστολέα (vemurafenib). Η ανίχνευση της V600EBRAF
μετάλλαξης έγινε σε δείγματα γενωμικού DNA, που προήλθαν τόσο από πλάσμα/ορό,
όσο και από ιστούς παραφίνης. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν με real-time PCR στο
όργανο LightCycler (Roche), παρουσία χρωστικής LC-Green Plus (Idaho Technology
Inc.) και με ανάλυση καμπυλών τήξης. Στη συνέχεια αναπτύχθηκε νέα μεθοδολογία,
που βασίζεται ακριβώς στον ίδιο σχεδιασμό (ARMS-PCR σε συνδυασμό με την ανάλυση
καμπυλών τήξης), με σκοπό την ανίχνευση της μετάλλαξης D538G στο γονιδίο ESR1,
η οποία εμπλέκεται στην αντίσταση στην ορμονοθεραπεία ασθενών με
ορμονοευαίσθητο καρκίνο μαστού. Σε ασθενείς που λαμβάνουν αρκετό διάστημα
ενδοκρινή θεραπεία, παρατηρήθηκε η απουσία της παραπάνω μετάλλαξης στον
πρωτοπαθή όγκο και η ταυτόχρονη παρουσία της σε μεταστατικό καρκίνο μαστού.
Αρκετά στοιχεία συνηγορούν στην δημιουργία της επίκτητης αυτής μετάλλαξης, μετά
από χορήγηση θεραπείας οιστρογόνων [133,135]. Συνεπώς, η ανάπτυξη και
βελτιστοποίηση της συγκεκριμένης μεθόδου, έχει ως μελλοντικό σκοπό, τόσο την
ανίχνευση μεταλλάξεων σε ιστούς πρωτοπαθούς όγκου, όσο και σε κυκλοφορούντα
καρκινικά κύτταρα πρωίμου και μεταστατικού καρκίνου μαστού.
Λέξεις-κλειδιά:
Οιστρογονικός υποδοχέας, Γονίδιο υπεύθυνο για το μελάνωμα, Υψηλής διακριτικότητας ανάλυση καμπυλών τήξης, Ελεύθερο κυττάρου DNA, Κυκλοφορούντα καρκινικά κύτταρα
Ευρετήριο:
Ναι
Αρ. σελίδων ευρετηρίου:
IX-XII
Εικονογραφημένη:
Ναι
Αρ. βιβλιογραφικών αναφορών:
211
Αριθμός σελίδων:
XII, 158
Αρχείο:
Δεν επιτρέπεται η πρόσβαση στο αρχείο.

document.pdf
4 MB
Δεν επιτρέπεται η πρόσβαση στο αρχείο.