Μονάδα:
ΠΜΣ Μικροβιακή ΒιοτεχνολογίαΒιβλιοθήκη Σχολής Θετικών Επιστημών
Ημερομηνία κατάθεσης:
2014-05-27
Συγγραφέας:
Τσάπατου Άννη
Στοιχεία επιβλεπόντων καθηγητών:
Αμαλία Δ. Καραγκούνη Καθηγήτρια (Επιβλέπουσα), Γεώργιος Διαλλινάς Αναπλ. Καθηγητής, Δημήτριος Χατζηνικολάου Επίκ. Καθηγητης
Πρωτότυπος Τίτλος:
Ανίχνευση αντιμικροβιακών ουσιών σε βακτήρια του εντερικού συστήματος υγιών νεογνών
Γλώσσες εργασίας:
Ελληνικά
Μεταφρασμένος τίτλος:
Detection of antimicrobial compounds produced from bacteria of the intestinal tract of healthy neonates
Περίληψη:
Σκοπός της παρούσης εργασίας ήταν η διερεύνηση της παραγωγής αντιμικροβιακών
ουσιών και συγκεκριμένα βακτηριοσινών από βακτηριακά στελέχη απομονωμένα από
κόπρανα υγιών νεογνών. Η ανίχνευση αντιμικροβιακής δράσης έγινε με τη χρήση των
μεθόδων διάχυσης σε άγαρ («διάχυση στην επιφάνεια του άγαρ» και «διάχυση σε
πηγάδι από άγαρ»). Συνολικά εξετάσθηκαν 50 στελέχη του γένους Lactobacillus και
22 του γένους Bifidobacterium ως προς 12 Gram θετικούς μικροοργανισμούς
δείκτες. Από αυτά τα στελέχη μόνο ένα εμφάνισε αντιμικροβιακή δράση στο
Lactobacillus delbrueckii DSMZ 20081 και με τις δύο μεθοδολογίες, το οποίο και
ταυτοποιήθηκε ως Lactobacillus gasseri με αλληλούχιση του 16S rDNA γονιδίου.
Στη συνέχεια έγινε προσδιορισμός της φύσης της αντιμικροβιακής ουσίας με την
επίδραση υδρολυτικών ενζύμων και καταλάσης. Ακολούθησε έλεγχος της
αντιμικροβιακής δράσης σε διάφορες τιμές pH και θερμοκρασίας, αλλά και
παρουσία διαφόρων αντιδραστηρίων. Από τη μελέτη αυτή προέκυψε ότι η
αντιμικροβιακή δράση του Lactobacillus gasseri οφείλεται σε μόριο πρωτεϊνικής
φύσης (βακτηριοσίνη), με περιορισμένο φάσμα δράσης, σταθερό σε διακυμάνσεις pH
και ιδιαίτερα θερμοανθεκτικό. Η παραγωγή της βακτηριοσίνης ξεκινούσε στην
εκθετική φάση ανάπτυξης του L. gasseri και έφτανε το μέγιστο της δραστικότητας
της (12.800 AU/ml) στην αρχή της στατικής φάσης του κύκλου αύξησης του. Από τα
πειράματα κινητικής θανάτωσης προέκυψε πως η δράση της βακτηριοσίνης έναντι του
L. delbrueckii subsp. bulgaricus DSMZ 20081 είναι πιθανά βακτηριολυτική, χωρίς
όμως να διαπιστωθεί απόλυτα ο ακριβής μηχανισμός της. Τέλος, έγινε απομόνωση
και καθαρισμός της βακτηριοσίνης με κατακρήμνιση με θειικό αμμώνιο και
χρωματογραφία μοριακής διήθησης. Ακολούθησαν δοκιμές ηλεκτροφόρησης των
πρωτεϊνικών εκχυλισμάτων που προέκυψαν από τη χρωματογραφία με σκοπό την εύρεση
του μοριακού βάρους της βακτηριοσίνης. Όλες οι δοκιμές που έλαβαν χώρα δεν
παρουσίασαν ακριβή αποτελέσματα καθώς φάνηκε πως η βακτηριοσίνη βρίσκεται σε
σύμπλοκο μαζί με άλλους πρωτεϊνικούς παράγοντες, γεγονός που υπέδειξε την
ανάγκη επεξεργασίας με επιπλέον τεχνικές χρωματογραφίας.
Λέξεις-κλειδιά:
Εντερικό σύστημα, Αντιμικροβιακές ουσίες, Βακτηριοσίνες, Λακτοβάκιλλοι, Μπιφιδοβακτήρια
Αρ. σελίδων ευρετηρίου:
0
Αρ. βιβλιογραφικών αναφορών:
145
