Χημικές αναλύσεις 24 επιλεγμένων δειγμάτων Βασιλικού πολτού της Ελληνικής Αγοράς-Εγκλωβισμοί σε λιποσώματα-Βιολογικές δράσεις

Διπλωματική Εργασία uoadl:2661948 406 Αναγνώσεις

Μονάδα:
Κατεύθυνση Απομόνωση, Ανάπτυξη, Παραγωγή και Έλεγχος Βιοδραστικών Φυσικών Προϊόντων
Βιβλιοθήκη Σχολής Θετικών Επιστημών
Ημερομηνία κατάθεσης:
2018-02-16
Έτος εκπόνησης:
2018
Συγγραφέας:
Αρβανίτης Χαράλαμπος
Στοιχεία επιβλεπόντων καθηγητών:
Καθηγήτρια κα Χήνου Ιωάννα Τμήμα Φαρμακευτικής ΕΚΠΑ
Καθηγήτρια κα Σκαλτσά Ελένη Τμήμα Φαρμακευτικής ΕΚΠΑ
Καθηγήτρια κα Μουτσάτσου Παρασκευή Τμήμα Ιατρικής ΕΚΠΑ
Πρωτότυπος Τίτλος:
Χημικές αναλύσεις 24 επιλεγμένων δειγμάτων Βασιλικού πολτού της Ελληνικής Αγοράς-Εγκλωβισμοί σε λιποσώματα-Βιολογικές δράσεις
Γλώσσες εργασίας:
Ελληνικά
Μεταφρασμένος τίτλος:
Χημικές αναλύσεις 24 επιλεγμένων δειγμάτων Βασιλικού πολτού της Ελληνικής Αγοράς-Εγκλωβισμοί σε λιποσώματα-Βιολογικές δράσεις
Περίληψη:
Ο βασιλικός πολτός είναι ένα παχύρευστο κρεμώδες έκκριμα από τους υποφαρυγγικούς αδένες των νεαρών εργατριών μελισσών του γένους Apis mellifera και αποτελεί μοναδική τροφή για την βασίλισσα κατά το προνυμφικό στάδιο και την υπόλοιπη ζωή της. Αποτελεί πλούσια πηγή πρωτεϊνών, σακχάρων, βιταμινών και αμινοξέων, όμως η σημαντικότερη ομάδα χημικών συστατικών που περιέχει είναι τα λιπαρά οξέα, χάρη στα οποία οφείλονται και οι φαρμακολογικές δράσεις του, όπως η αντιμικροβιακή, η αντιοξειδωτική, η υποχοληστερολαιμική-υπολιπιδαιμική, η δράση στο ανοσοποιητικό κ.λ.π.
Στα πλαίσια της παρούσας εργασίας, αναλύθηκαν 24 δείγματα βασιλικών πολτών της ελληνικής αγοράς ως προς τη ποιοτική και ποσοτική τους σύσταση με την τεχνική της αέριας χρωματογραφίας συνδεδεμένης με φασματομετρία μάζας (GC-MS), και έγιναν συγκριτικές μελέτες της σύστασής τους ανάλογα με τη προέλευσή τους.
Στο δείγμα βασιλικού πολτού Κρήτης, που δεν έχει μελετηθεί προηγούμενα, πραγματοποιήθηκε χημική μελέτη για την απομόνωση και τον προσδιορισμό της δομής των δευτερογενών μεταβολιτών το (διχλωρομεθανικό, μεθανολικό και υδατικό εκχύλισμα).
Το πειραματικό μέρος περιλαμβάνει αρχικά χημική μελέτη ενός ελληνικού δείγματος από την Κρήτη (κωδικός Gr VII) για την απομόνωση και καθορισμό της δομής των χημικών συστατικών με σύγχρονες χρωματογραφικές και φασματοσκοπικές μεθόδους και στη συνέχεια, χάρη στα φασματοσκοπικά δεδομένα από την ανάλυση με GC-MS του διχλωρομεθανικού εκχυλίσματος και των ουσιών που απομονώθηκαν από το δείγμα αυτό, συγκριτική μελέτη 23 επιπλέον δειγμάτων βασιλικών πολτών της ελληνικής αγοράς (ελληνικής και ξένης προέλευσης) ως προς τον αριθμό και τα ποσοστά των συστατικών τους.
Από τη μελέτη του δείγματος Gr VII απομονώθηκαν συνολικά 10 φυσικά προϊόντα, ενώ έγινε και ταυτοποίηση ορισμένων με τη τεχνική GC-MS. Από το διχλωρομεθανικό εκχύλισμα του δείγματος απομονώθηκαν και ταυτοποιήθηκαν 5 λιπαρά οξέα (1, 2, 3, 4, και 6) 1 αλειφατική κετόνη (5) και 1 αρωματικό συστατικό (7). Από το μεθανολικό εκχύλισμα απομονώθηκαν και ταυτοποιήθηκαν 1 στερόλη (8) και 1 λιπαρό οξύ (9), ενώ από το υδατικό εκχύλισμα απομονώθηκε και ταυτοποιήθηκε 1 λιπαρό οξύ (10).



trans 10-υδροξυ-2-δεκενοϊκό οξύ (1) trans 10-ακετοξυ-2-δεκενοϊκό οξύ (2)



10-υδροξυδεκανοϊκό οξύ (3) 10-ακετοξυδεκανοϊκό οξύ (4)



9-υδροξυ-2-νονανόνη (5) δεκαοκτανοϊκό οξύ (6)



p-υδροξυβενζοϊκός μεθυλεστέρας (methylparaben) (7)


24-μεθυλενοχοληστερόλη (8) 9-υδροξυ-2-δεκενοϊκό οξύ (9)



3,10-διυδροξυδεκανοϊκό οξύ (10)
Και οι δέκα ουσίες που απομονώθηκαν από το συγκεκριμένο δείγμα έχουν αναφερθεί ως συστατικά του βασιλικού πολτού σύμφωνα με τη βιβλιογραφία. Το 10-υδροξυ-2-δεκενοϊκό οξύ (1), το κυριότερο λιπαρό οξύ του βασιλικού πολτού και το 10-υδροξυδεκανοϊκό οξύ (3) το οποίο είναι κορεσμένο παράγωγο του (1), βρίσκονται σε υψηλές συγκεντρώσεις στο βασιλικό πολτό και αποτελούν τους κυριότερους δευτερογενείς μεταβολίτες του. Βασικά συστατικά επίσης αποτελούν το 3,10-διυδροξυδεκανοϊκό οξύ (10) και το 9-υδροξυ-2-δεκενοϊκό οξύ (9), Επιπλέον σε υψηλή συγκέντρωση βρίσκεται η στερόλη 24-μεθυλενοχοληστερόλη (8). Επίσης σε σχετικά μικρές ποσότητες έχει αναφερθεί η παρουσία του δεκαοκτανοϊκού οξέως (6), το οποίο απομονώθηκε για πρώτη φορά στη παρούσα μελέτη. Τέλος, για δεύτερη φορά απομονώθηκαν οι δευτερογενείς μεταβολίτες p-υδροξυβενζοϊκός μεθυλεστέρας (7), 10-ακετοξυδεκανοϊκό οξύ (4), 10-ακετοξυ-2-δεκενοϊκό οξύ (2) και 9-υδροξυ-2-νονανόνη (5).
Τα αποτελέσματα από τις αναλύσεις των 24 δειγμάτων βασιλικών πολτών έδειξαν, πως η ποιότητα των ελληνικών δειγμάτων ήταν πολύ καλή καθώς είχαν πλούσια σύσταση και τα ποσοστά των κυριότερων συστατικών ήταν σε ικανοποιητικά ποσοστά. Επιπλέον αποδεκτή ήταν και η ποιότητα των δειγμάτων ευρωπαϊκής προέλευσης για τους παραπάνω λόγους, ωστόσο δύο δείγματα (Ισπανίας και Ιταλίας) βρέθηκαν να είναι κατώτερης ποιότητας. Εξίσου πολύ καλή ποιότητα με τα ελληνικά είχαν τα κινέζικα δείγματα λόγω ποικιλίας σε συστατικά και υψηλών ποσοστών στα κυριότερα συστατικά, όμως ανάμεσα σε αυτά υπήρξε και ένα του οποίου η ποιότητα κρίνεται αμφίβολη.
Όσον αφορά τις βιολογικές δράσεις, αρχικά εξετάστηκε in vitro η αντιμικροβιακή δράση του trans 10-υδροξυ-2-δεκενοϊκού οξέως έναντι παθογόνων Gram (+) και Gram (-) βακτηρίων και μυκήτων με τη μέθοδο Bauer-Kirby και στη συνέχεια η αντιοξειδωτική δράση της ουσίας αυτής με τη μέθοδο Rancimat, τη μέθοδο της διαφορικής θερμιδομετρίας σάρωσης (Differential Scanning Calorimetry) και τη μέθοδο δέσμευσης ελευθέρων ριζών (DPPH . ). Η μελέτη των δράσεων αυτών έγινε πριν και μετά τον εγκλωβισμό της ουσίας σε λιποσώματα.
Πραγματοποιήθηκε εγκλωβισμός ορισμένης ποσότητας (2mg) του trans 10-υδροξυ-2-δεκενοϊκού οξέως σε λιποσώματα, τα οποία αποτελούν συστήματα μεταφοράς ουσιών, τις οποίες και προστατεύουν από αντιδράσεις οξείδωσης καθώς και από χημική ή ενζυμική αποικοδόμηση. Επιπλέον παρασκευάστηκαν κενά λιποσώματα (lipref) και εξετάστηκε η υπό μελέτη ουσία στην ελεύθερη μορφή της. Τα αποτελέσματα του αντιμικροβιακού ελέγχου έδειξαν πως ο εγκλωβισμός σε λιποσώματα ενίσχυσε την δράση του (1) σε σχέση με την ελεύθερη μορφή του, κυρίως έναντι των Gram (+) βακτηρίων. Άρα το συμπέρασμα το οποίο προκύπτει είναι πως η αντιμικροβιακή δράση του (1) όντως ενισχύεται με τον εγκλωβισμό σε λιποσώματα. Από την άλλη, δεν παρατηρήθηκε αντιοξειδωτική δράση της ελεύθερης μορφής του (1) και στις τρεις μεθόδους που εφαρμόστηκαν.
Επίσης ένα από τα δείγματά μας το οποίο ήταν ελληνικής προέλευσης (Άρτας) εξετάστηκε και ως προς τη δράση του στο νευρικό σύστημα και συγκεκριμένα πως επιδρά στη μνήμη σε αρσενικούς αρουραίους τύπου Wistar Albino Glaxo (WAG) in vivo και στη συγκέντρωση των μονοαμινών και νευροδιαβιβαστών σε διάφορα σημεία του εγκεφάλου τους, με τη μέθοδο Water-maze. Τα αποτελέσματα των πειραμάτων έδειξαν στη πρώτη περίπτωση πως η χορήγηση 50 ή 100mg από το δείγμα μας στους αρουραίους επηρέασε θετικά τη μνήμη συγκριτικά με το control. Στη δεύτερη περίπτωση επίσης τα αποτελέσματα στη συγκέντρωση των μονοαμινών και των νευροδιαβιβαστών σε διάφορα σημεία του εγκεφάλου των αρουραίων ήταν σημαντικά, καθώς τα επίπεδα αυτών επηρεάζονταν θετικά, αρνητικά ή και καθόλου με τη χορήγηση 50 ή 100mg από το δείγμα μας.
Κύρια θεματική κατηγορία:
Θετικές Επιστήμες
Λέξεις-κλειδιά:
βασιλικός πολτός, λιπαρά οξέα, λιποσώματα, βιολογικές δράσεις
Ευρετήριο:
Ναι
Αρ. σελίδων ευρετηρίου:
2
Εικονογραφημένη:
Ναι
Αρ. βιβλιογραφικών αναφορών:
230
Αριθμός σελίδων:
154
Αρχείο:
Δεν επιτρέπεται η πρόσβαση στο αρχείο. H πρόσβαση επιτρέπεται μόνο εντός του δικτύου του ΕΚΠΑ.

final metaptyxiaki ergasia.pdf
4 MB
Δεν επιτρέπεται η πρόσβαση στο αρχείο. H πρόσβαση επιτρέπεται μόνο εντός του δικτύου του ΕΚΠΑ.