Investigating the role of WiNTRLINC3 in intestinal homeostasis and carcinogenesis

Διπλωματική Εργασία uoadl:2785153 62 Αναγνώσεις

Μονάδα:
Κατεύθυνση Μοριακή Βιοϊατρική - Μηχανισμοί Ασθενειών, Μοριακές και Κυτταρικές θεραπείες και Βιοκαινοτομία
Βιβλιοθήκη Επιστημών Υγείας
Ημερομηνία κατάθεσης:
2018-09-12
Έτος εκπόνησης:
2018
Συγγραφέας:
Γαλάρας Αλέξανδρος
Στοιχεία επιβλεπόντων καθηγητών:
Παντελής Χατζής, Ερευνητής Β', ΕΚΕΒΕ Φλεμινγκ
Γεώργιος Κόλλιας, Καθηγητής, Ιατρικής, ΕΚΠΑ
Αντιγόνη Δήμα, Ερευνήτρια Γ', ΕΚΕΒΕ Φλεμινγκ
Πρωτότυπος Τίτλος:
Investigating the role of WiNTRLINC3 in intestinal homeostasis and carcinogenesis
Γλώσσες εργασίας:
Αγγλικά
Μεταφρασμένος τίτλος:
Διερεύνηση του ρόλου του WiNTRLINC3 στη φυσιολογία και καρκινογένεση του εντέρου
Περίληψη:
Το σηματοδοτικό μονοπάτι Wnt/β-catenin αποτελεί το σημαντικότερο ρυθμιστή της διαδικασίας αναγέννησης των επιθηλιακών κυττάρων του εντέρου. Ειδικότερα, το μονοπάτι διαμορφώνει το μεταγραφικό πρόγραμμα πολλών γονιδίων που είναι υπεύθυνα για τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και τη φυσιολογία των βλαστοκυττάρων του εντέρου. Μεταλλάξεις που διαταράσσουν τη λειτουργία του μονοπατιού προκαλούν ανεξέλεγκτο κυτταρικό πολλαπλασιασμό και τελικά οδηγούν σε καρκίνο του εντέρου. Πολλές από τις γονιδιακές περιοχές-στόχους του συμπλόκου β-catenin-TCF4, εδράζονται σε μη κωδικές περιοχές. Μεταξύ αυτών, υπάρχουν γονίδια που μεταγράφονται σε μακρά μη κωδικά RNA (lncRNAs), τα οποία λειτουργούν ως ρυθμιστές ή λειτουργικοί στόχοι του Wnt/β-catenin μονοπατιού και συνεπώς τροποποιούν την φυσιολογία του εντέρου.
Στην μελέτη μας, αποσαφηνίσαμε το ρόλο του WiNTRLINC3 (Wnt Regulated lncRNA 3), ένα lncRNA που ρυθμίζεται αρνητικά από το Wnt/β-catenin μονοπάτι. In cis υπερέκφραση του ενδογενούς γονιδίου WiNTRLINC3 με το σύστημα CRISPRa, μείωσε τον πολλαπλασιασμό και την ικανότητα των καρκινικών κυττάρων να σχηματίζουν νέους κλώνους. Επίσης, αύξησε την έκφραση γονιδίων που σχετίζονται με την κυτταρική προσκόλληση και διαφοροποίηση, ενώ μείωσε την έκφραση πρωτεϊνών που προάγουν την κυτταρική αύξηση στα παραπάνω κύτταρα. Ανάμεσα στα διαφορικά εκφραζόμενα γονίδια, ξεχωρίσαμε το IGSF9, ένα γειτονικό γονίδιο του WiNTRLINC3 που εκφράζει μια πρωτεΐνη κυτταρικής προσκόλλησης. Συγκεκριμένα, δείξαμε ότι το WiNTRLINC3 μετάγραφο ρυθμίζει θετικά την έκφραση του IGSF9, αλλά δε συμβαίνει το αντίθετο. Σε συμφωνία με τα παραπάνω,τόσο το WiNTRLINC3 όσο και το IGSF9, εμφανίζουν μειωμένη έκφραση σε δείγματα ασθενών με καρκίνους του παχέος εντέρου (πηγή δειγμάτων:Άτλαντα Καρκινικού Γονιδιώματος,TCGA).
Στη συνέχεια, μελετήσαμε το ρόλο του μεταγραφικού παράγοντα CDX2 (Caudal Type Homeobox 2), ο οποίος δείχθηκε ότι αλληλεπιδρά με το μετάγραφο του WiNTRLINC3 με πειράματα κατακρήμνισης του RNA σε σύζευξη με φασματομετρία μάζας. Ανάλυση δεδομένων αλληλούχισης του cDNA από ανοσοκατακρήμνιση χρωματίνης που στοχεύει την πρωτεΐνη CDX2 σε καρκινικά κύτταρα εντέρου, έδειξε ότι η CDX2 προσδένεται στον υποκινητή και στον ενισχυτή του WiNTRLINC3 γονιδίου. Περαιτέρω μελέτες, χρησιμοποιώντας την αντίδραση λουσιφεράσης, έδειξαν ότι η CDX2 δε μπορεί να αυξήσει από μόνη της την ενεργότητα του υποκινητή του WiNTRLINC3 γονιδίου, in vitro.
Οι έρευνες μας, φανερώνουν τη σημασία του lncRNA WiNTRLINC3 στην φυσιολογία και καρκινογένεση του παχέος εντέρου, αποσκοπώντας στον χαρακτηρισμό ενός νέου βιοδείκτη για τον καρκίνο του παχέος εντέρου.
Κύρια θεματική κατηγορία:
Επιστήμες Υγείας
Λέξεις-κλειδιά:
Καρκίνος, CDX2, Wnt μονοπάτι, Γονιδιακή ρύθμιση, IGSF9, Μακρά μη κωδικά RNA
Ευρετήριο:
Όχι
Αρ. σελίδων ευρετηρίου:
0
Εικονογραφημένη:
Ναι
Αρ. βιβλιογραφικών αναφορών:
149
Αριθμός σελίδων:
52
Alexandros_Galaras_thesis.pdf (1 MB) Άνοιγμα σε νέο παράθυρο