Investigation of the Molecular Mechanisms Involved in Activin-A-induced regulation of Th17 mediated CNS autoimmune inflammation

Διπλωματική Εργασία uoadl:2837003 11 Αναγνώσεις

Μονάδα:
Κατεύθυνση Μοριακή Βιοϊατρική - Μηχανισμοί Ασθενειών, Μοριακές και Κυτταρικές θεραπείες και Βιοκαινοτομία
Βιβλιοθήκη Επιστημών Υγείας
Ημερομηνία κατάθεσης:
2018-12-06
Έτος εκπόνησης:
2018
Συγγραφέας:
Παπαδοπούλου Γεωργία-Άρτεμις
Στοιχεία επιβλεπόντων καθηγητών:
Γεωργία Ξάνθου-Τσιγκόγλου, Επίκουρος καθηγήτρια - Ερευνήτρια Γ', Ίδρυμα Ιατροβιολογικών Ερευνών Ακαδημίας Αθηνών
Παναγιώτης Βεργίνης, Ερευνητής Γ', Ίδρυμα Ιατροβιολογικών Ερευνών Ακαδημίας Αθηνών
Ευσταθία Καψογεώργου, Επίκουρη Καθηγήτρια, Ιατρική, ΕΚΠΑ
Πρωτότυπος Τίτλος:
Investigation of the Molecular Mechanisms Involved in Activin-A-induced regulation of Th17 mediated CNS autoimmune inflammation
Γλώσσες εργασίας:
Αγγλικά
Μεταφρασμένος τίτλος:
Μελέτη των Μοριακών Μηχανισμών που Εμπλέκονται στην Επαγόμενη απο την Ακτιβίνη-Α Ρύθμιση των Th17 Κυττάρων, στα Πλαίσια της Αυτοανοσίας του Κεντρικού Νευρικού Συστήματος
Περίληψη:
Εισαγωγή: Η ακτιβίνη Α είναι μία πλειοτροπική κυτταροκίνη που ανήκει στην υπερ-οικογένεια του TGF-β. Η πλειονότητα των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος μπορεί να εκκρίνει αλλά και να ανταποκριθεί στην παρουσία ακτιβίνης Α και η ανοσολογική της συνάφεια έχει αναγνωρισθεί σε διάφορα στάδια ασθενειών όπου έχει συσχετισθεί τόσο με προ- όσο και με αντι-φλεμονώδεις δράσεις. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η ακτιβίνη Α μειώνει τη σοβαρότητα της ασθένειας σε ένα μυϊκό μοντέλο επαγωγής σκλήρυνσης κατά πλάκας, όπου τα ποντίκια επιδεικνύουν βελτιωμένα κλινικά χαρακτηριστικά καθώς και μειωμένη διήθηση φλεγμονωδών κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος στο κεντρικό νευρικό σύστημα έπειτα από χορήγηση ακτιβίνης Α in vivo.
Υπόθεση-Στόχοι: Η υπόθεσή μας ήταν ότι η ακτιβίνη Α είναι ικανή να καταστείλει τις επαγόμενες από CD4+ Τ βοηθητικά κύτταρα παθογενετικές αποκρίσεις μέσω μεταβολής του προ-φλεγμονώδη φαινοτύπου τους προς αντι-φλεγμονώδη. Στόχος αυτής της μελέτης είναι η αποσαφήνιση των μοριακών μηχανισμών μέσω των οποίων η ακτιβίνη Α μεταβάλλει/ρυθμίζει την παθογένεια των τύπου 17 CD4+ Τ βοηθητικών κυττάρων.
Μέθοδοι: Αθώα CD4+ Τ κύτταρα απομονώθηκαν από τον σπλήνα και τους λεμφαδένες ποντικιών και καλλιεργήθηκαν κάτω από συνθήκες που επάγουν τη δημιουργία παθογενετικών CD4+ Τ βοηθητικών κυττάρων παρουσία ή απουσία ακτιβίνης Α. Το μεταγραφικό και φαινοτυπικό προφίλ των κυττάρων αυτών αναλύθηκε με αλληλούχιση RNA, ποσοτική PCR, κυτταρομετρία ροής, ELISA, ανοσοφθορισμό and στύπωμα κατά Western. Οι μοριακοί μηχανισμοί που συμμετέχουν στη δράση της ακτιβίνης Α στα τύπου 17 CD4+ Τ βοηθητικά κύτταρα αναλύθηκαν μέσω βιοπληροφορικής και ανοσοκατακρήμνισης χρωματίνης ακολουθούμενης από ανάλυση από PCR πραγματικού χρόνου.
Αποτελέσματα: Οι μελέτες μας αποκάλυψαν ότι η ακτιβίνη Α μεταβάλλει το μεταγραφικό προφίλ των τύπου 17 CD4+ Τ βοηθητικών κυττάρων. Ειδικότερα, η ακτιβίνη Α μέσω του κυρίου σηματοδοτικού της μονοπατιού μείωσε την έκφραση των κυτταροκινών GM-CSF, IFN-γ, IL-1β and TNF-α καθώς και των μεταγραφικών παραγόντων T-bet and HIF-1a σε επίπεδο τόσο γονιδιακής όσο και πρωτεϊνικής έκφρασης. Αντίθετα, η ακτιβίνη Α αύξησε την έκφραση της ανοσορυθμιστικής κυτταροκίνης IL-10 μαζί με αυτή των μεταγραφικών παραγόντων c-Maf and Ahr. Αξίζει να σημειωθεί ότι η ακτιβίνη Α μέσω του κυρίου σηματοδοτικού της μονοπατιού αύξησε σημαντικά την έκφραση των εκτονουκλεοτιδασών CD39 and CD73 που επάγουν την καταβολή του eATP και συμμετέχουν ενεργά στην επαγόμενη από την ακτιβίνη Α καταστολή του παθογενετικού προφίλ των τύπου 17 CD4+ Τ βοηθητικών κυττάρων. Επιπλέον, αναλύσαμε του μοριακούς μηχανισμούς που μεσολαβούν την επαγόμενη από την ακτιβίνη Α αλλαγή του προφίλ των παθογενετικών τύπου 17 CD4+ Τ βοηθητικών κυττάρων, όπου ανακαλύψαμε ότι η αύξηση της έκφρασης της κυτταροκίνης IL-10 πραγματοποιείται μέσω αυξημένης πρόσδεσης των μεταγραφικών παραγόντων Ahr and c-Maf στον υποκινητή του γονιδίου της IL-10 στα τύπου 17 CD4+ Τ βοηθητικά κύτταρα που καλλιεργήθηκαν παρουσία της ακτιβίνης Α. Ακόμη, ανακαλύψαμε αυξημένη πρόσδεση του μεταγραφικού παράγοντα STAT3 μαζί με τον Ahr στον γονιδιακό τόπο του entpd1 που κωδικοποιεί την εκτονουκλεοτιδάση CD39 καθώς και των μεταγραφικών παραγόντων STAT3, Ahr και c-Maf στον γονιδιακό τόπο του NT5e που κωδικοποιεί για την εκτονουκλεοτιδάση CD73 στα τύπου 17 CD4+ Τ βοηθητικά κύτταρα που καλλιεργήθηκαν παρουσία ακτιβίνης Α. Τέλος, παρατηρήσαμε ότι η ακτιβίνη Α μέσω του κυρίου σηματοδοτικού της μονοπατιού μειώνει την έκφραση του μεταγραφικού παράγοντα HIF-1a στα τύπου 17 CD4+ Τ βοηθητικά κύτταρα μέσω ενός μηχανισμού που περιλαμβάνει τη μεσουλαβούμενη από τον μεταγραφικό παράγοντα Ahr αύξηση των PHD πρωτεϊνών που είναι υπεύθυνες για τη ρύθμιση του HIF-1a.
Συμπεράσματα: Συμπερασματικά, οι μελέτες μας αποκαλύπτουν ότι η ακτιβίνη Α καταστέλλει τον παθογενετικό φαινότυπο των τύπου 17 CD4+ Τ βοηθητικών κυττάρων μέσω αύξησης του μονοπατιού καταβολής του eATP καθώς και την ανοσορυθμιστικής κυτταροκίνης Il-10 με μοριακούς μηχανισμούς που εμπλέκουν τη ρύθμιση των μεταγραφικών παραγόντων STAT3, Ahr και c-Maf. Επιπροσθέτως, η ακτιβίνη Α καταστέλλει την έκφραση του μεταγραφικού παράγοντα HIF-1a στα τύπου 17 CD4+ Τ βοηθητικά κύτταρα που αποτελεί ένα καίριο μεταβολικό σημείο ελέγχου που εμπλέκεται στις παθογενετικές δράσεις τον τύπου 17 CD4+ Τ βοηθητικών κυττάρων. Θεωρούμε ότι οι μελέτες μας χαρακτηρίζουν την ακτιβίνη Α ως έναν αρνητικό ρυθμιστή του παθογενετικού προφίλ των τύπου 17 CD4+ Τ βοηθητικών κυττάρων καθιερώνοντάς την ως πιθανό θεραπευτικό στόχο για την σκλήρυνση κατά πλάκας.
Κύρια θεματική κατηγορία:
Επιστήμες Υγείας
Λέξεις-κλειδιά:
Ακτιβίνη-α, Αυτοανοσία, Th17, Ανοσορύθμιση
Ευρετήριο:
Όχι
Αρ. σελίδων ευρετηρίου:
0
Εικονογραφημένη:
Ναι
Αρ. βιβλιογραφικών αναφορών:
111
Αριθμός σελίδων:
54

Gina Papadopoulou -Thesis.pdf
2 MB
Δεν επιτρέπεται η πρόσβαση στο αρχείο έως 2019-12-06.