Μελέτη έκφρασης των υποδοχέων CRH-R1 και CRH-R2 της ορμόνης CRH σε ανθρώπινες βλαστοκύστεις

Διπλωματική Εργασία uoadl:2838302 56 Αναγνώσεις

Μονάδα:
ΠΜΣ Αναπαραγωγική-Αναγεννητική Ιατρική
Βιβλιοθήκη Επιστημών Υγείας
Ημερομηνία κατάθεσης:
2018-12-20
Έτος εκπόνησης:
2018
Συγγραφέας:
Κασφίκη Ελένη Σοφία
Στοιχεία επιβλεπόντων καθηγητών:
Λουτράδης Δημήτριος, Καθηγητής, Ιατρική, ΕΚΠΑ
Καλλιανίδης Κωνσταντίνος, Αναπληρωτής Καθηγητής, Ιατρική, ΕΚΠΑ
Δρακάκης Πέτρος, Αναπληρωτής Καθηγητής, Ιατρική, ΕΚΠΑ
Πρωτότυπος Τίτλος:
Μελέτη έκφρασης των υποδοχέων CRH-R1 και CRH-R2 της ορμόνης CRH σε ανθρώπινες βλαστοκύστεις
Γλώσσες εργασίας:
Ελληνικά
Μεταφρασμένος τίτλος:
Μελέτη έκφρασης των υποδοχέων CRH-R1 και CRH-R2 της ορμόνης CRH σε ανθρώπινες βλαστοκύστεις
Περίληψη:
Η ορμόνη κορτικοεκλυτίνη (CRH, Corticotrophin Releasing Hormone) είναι ένα νευροπεπτίδιο με 41 αμινοξέα το οποίο πρωτοαπομονώθηκε από τον υποθάλαμο προβάτου. Η βασική της λειτουργία εστιάζεται στη ρύθμιση της έκκρισης της αδρενοκορτικοτρόπου ορμόνης (ACTH, Adrenocorticotropic hormone) από την υπόφυση ενώ είναι ευρύτατα κατανεμημένη στον εγκέφαλο όπου συντονίζει τις ενδοκρινικές και συμπεριφορικές αποκρίσεις του Αυτόνομου Νευρικού Συστήματος (ΑΝΣ) στο στρες. Λειτουργεί, επίσης, ως διαμεσολαβητής μεταξύ ανοσοποιητικού, νευρικού και ενδοκρινικού συστήματος.
Η CRH, εκτός από την ευρύτατη κατανομή της στον εγκέφαλο, εντοπίζεται στα επινεφρίδια, στα ανθρώπινα λεμφοκύτταρα, στις ενεργές φλεγμονώδεις περιοχές, στον πλακούντα, στη μήτρα, στις ωοθήκες, στο φθαρτό, στην τροφοβλάστη και στους ενδομήτριους αδένες.
Η ορμόνη CRH έχει δύο υποδοχείς, τον υποδοχέα της κορτικοεκλυτίνης 1 (CRH-R1) και τον υποδοχέα της κορτικοεκλυτίνης 2 (CRH-R2), που ανήκουν στην οικογένεια των G πρωτεϊνών και κωδικοποιούνται από δύο διαφορετικά γονίδια. Σε μελέτες που έγιναν, βρέθηκε ότι σε μορίδια και βλαστοκύστεις θηλυκών ποντικιών εκφράζεται μόνο ο CRH-R1 υποδοχέας.
Κατά τη διάρκεια της εμφύτευσης της βλαστοκύστης, το μητρικό ενδομήτριο ανταποκρίνεται με χαρακτηριστικά οξείας, άσηπτης φλεγμονώδους αντίδρασης. Παρόλα αυτά μετά την εμφύτευση, το έμβρυο καταστέλλει αυτή την αντίδραση και αποτρέπει την απόρριψη. Έχει αποδειχθεί ότι τα κύτταρα της εμβρυϊκής τροφοβλάστης και τα κύτταρα του φθαρτού παράγουν την ορμόνη CRH και εκφράζουν τον συνδέτη της προαποπτωτικής κυτταροκίνης Fas (FasL, CD95L). Ιn vitro ευρήματα από την άλλη έδειξαν ότι όταν ο υποδοχέας CRH-R1 έχει μπλοκαριστεί από την ανταλαρμίνη, ανταγωνιστή του υποδοχέα CRH-R1, αυξάνει την διείσδυση της τροφοβλάστης κατά περίπου 60%.
Η ορμόνη CRH παίζει κρίσιμο ρόλο στην εμφύτευση και στην αποτροπή της απόρριψης του κυήματος ενώ προστατεύει το έμβρυο από την μητρική ανοσοποιητική απάντηση, εξουδετερώνοντας τα ενεργοποιημένα Τ λεμφοκύτταρα μέσω της αλληλεπίδρασης του μορίου Fas με τον FasL. In vivo μελέτες σε αρουραίους με χορήγηση ανταλαρμίνης έδειξαν αξιοσημείωτη μείωση θέσεων εμφύτευσης κατά 70% και μειωμένη έκφραση του συνδέτη Fas. Αυτό καταδεικνύει ότι όταν ο άξονας CRH/CRH-R1 δεν λειτουργεί σωστά υπάρχει μεγάλο ποσοστό υπευθυνότητας για καθ’έξιν αποβολές, προεκλαμψία και ανεπάρκεια πλακούντα.
Στην παρούσα μελέτη, σε συνέχεια των πειραματικών δεδομένων που απέδειξαν την ύπαρξη και των δύο υποδοχέων της CRH σε όλα τα στάδια άναπτυξης των ωοθυλακίων ποντικών, αλλά μόνο την ύπαρξη του υποδοχέα R1 στο στάδιο του μοριδίου και της βλαστοκύστης, εξετάστηκε η ύπαρξη μεταγραφικής δραστηριότητας των υποδοχέων της CRH (R1 και R2) σε ανθρώπινες πλεονάζουσες βλαστοκύστεις γυναικών που συμμετείχαν σε πρόγραμμα Εξωσωματικής Γονιμοποίησης. Το ερώτημα αυτό προσεγγίστηκε με τεχνικές μοριακής βιολογίας: απομόνωση ολικού RNA από ανθρώπινες βλαστοκύστεις, σύνθεση του συμπληρωματικού DNA (cDNA) και αλυσιδωτη αντίδραση πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο (Real Time PCR) με τη μέθοδο των τυχαίων εξαμερών.
Τα αποτελέσματα επιβεβαίωσαν τη διαειδική ύπαρξη του υποδοχέα R1 σε επίπεδο μεταγραφής στον άνθρωπο και στον ποντικό. Από την άλλη, αναφορικά με τον υποδοχέα R2, δεν βρέθηκαν μετάγραφα του υποδοχέα R2 στις ανθρώπινες βλαστοκύστεις, επιβεβαιώνοντας προηγούμενες μελέτες. Συμπερασματικά, τα παραπάνω αποτελέσματα είναι εκδεικτικά της πιθανής συμμετοχής του άξονα CRH/CRH-R1 στα προεμφυτευτικά στάδια της βλαστοκύστης στον άνθρωπο και συνολικά αξιολογώντας την ανίχνευση του R1 υποδοχέα στον ποντικό και στον άνθρωπο δείχνει έναν άξονα που είναι συντηρημένος εξελικτικά στα δύο αυτά θηλαστικά.
Κύρια θεματική κατηγορία:
Επιστήμες Υγείας
Λέξεις-κλειδιά:
CRH, CRH-R1, CRH-R2, Υποδοχείς, Ορμόνες, Εμφύτευση, Ανθρώπινες βλαστοκύστεις, Στρες και γονιμότητα
Ευρετήριο:
Όχι
Αρ. σελίδων ευρετηρίου:
0
Εικονογραφημένη:
Ναι
Αρ. βιβλιογραφικών αναφορών:
68
Αριθμός σελίδων:
94
Sofia_Eleni Kasfiki Master.pdf (2 MB) Άνοιγμα σε νέο παράθυρο