In vitro πολλαπλασιασμός και διαφοροποίηση ανθρώπινων εμβρυονικών βλαστικών κυττάρων

Διδακτορική Διατριβή uoadl:1308494 208 Αναγνώσεις

Μονάδα:
Τομέας Υγείας - Μητέρας - Παιδιού
Βιβλιοθήκη Επιστημών Υγείας
Ημερομηνία κατάθεσης:
2016-06-10
Έτος εκπόνησης:
2015
Συγγραφέας:
Καραγιαννίδου Αγγελική
Στοιχεία επταμελούς επιτροπής:
Καθηγητής Εμμανουήλ Καναβάκης
Πρωτότυπος Τίτλος:
In vitro πολλαπλασιασμός και διαφοροποίηση ανθρώπινων εμβρυονικών βλαστικών κυττάρων
Γλώσσες διατριβής:
Ελληνικά
Μεταφρασμένος τίτλος:
In vitro proliferation and differentiation of human embryonic stem cells
Περίληψη:
Τα κύτταρα που προέρχονται από τα πρώιμα στάδια του ανθρώπινου εμβρύου
χαρακτηρίζονται ως Eμβρυονικά Βλαστικά κύτταρα (ΕΒΚ) και αποτελούν τα κύτταρα-
πρόγονους όλων των ιστών του ανθρώπινου οργανισμού. Με δεδομένο το ευρύ φάσμα
των μελλοντικών εφαρμογών τους στην κλινική πράξη, σκοπός μας ήταν η ανάπτυξη
μεθόδων καλλιέργειας και η μελέτη του πολλαπλασιασμού και της διαφοροποίησής
τους με τη χρήση ειδικών αυξητικών παραγόντων, για πρώτη φορά στην Ελλάδα.
Αρχικά, καλλιεργήθηκε η εμβρυονική καρκινική κυτταρική σειρά 2102Ep Cl.2/A6 P48
(GlobalStem Inc.) προκειμένου να πραγματοποιηθεί αξιολόγηση των καλλιεργητικών
υλικών και συνθηκών.
Στη συνέχεια, καλλιεργήθηκαν οι κυτταρικές σειρές αΕΒΚ HUES-9p18 και HUES-7p15.
Η διατήρηση της πολυδυναμίας τους εξετάστηκε με μελέτη της έκφρασης των
μεταγραφικών παραγόντων Oct3/4, Nanog, Sox2, Rex-1 με την τεχνική RT-PCR, καθώς
και της έκφρασης του επιφανειακού κυτταρικού αντιγόνου SSEA-4 με κυτταρομετρία
ροής.
Στο επόμενο στάδιο πραγματοποιήθηκε διαφοροποίηση αυτών προς
κυτταρικούς τύπους εξωδερμικής (προγονικά νευρικά κύτταρα), μεσοδερμικής
(προγονικά αιμοποιητικά κύτταρα και μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα) και
ενδοδερμικής (κύτταρα καθορισμένου ενδοδέρματος) προέλευσης. Η διαφοροποίηση
προς όλους τους κυτταρικούς τύπους ήταν επιτυχής. Επιπλέον, προσδιορίστηκε η
γενετική σταθερότητα των αδιαφοροποίητων και των διαφοροποιημένων αΕΒΚ με τη
μέθοδο του μοριακού καρυοτύπου (Agilent 1x244K και 4x180K CGH και SNPs arrays).
Στη συνέχεια, παρακολουθήσαμε τις μοριακές βλάβες σε μεσεγχυματικά και νευρικά
κύτταρα, προερχόμενα από διαφοροποίηση αΕΒΚ. Δεν διαπιστώθηκαν in vitro
χαρακτηριστικά νεοπλασματικής εξαλλαγής. Τα τελευταία συνηγορούν στην άποψη ότι
οι υποχρωμοσωμικές βλάβες προκύπτουν από την προσπάθεια των άωρων κυττάρων να
προσαρμοστούν στην καλλιέργεια (culture adaptation) και δεν αποτελούν βλάβες
που επηρεάζουν το πολλαπλασιαστικό και διαφοροποιητικό δυναμικό των κυττάρων.
Λέξεις-κλειδιά:
Εμβρυονικά , Βλαστικά Κύτταρα, Διαφοροποίηση, Πολλαπλασιασμός, Πολυδύναμα
Ευρετήριο:
Όχι
Αρ. σελίδων ευρετηρίου:
0
Εικονογραφημένη:
Ναι
Αρ. βιβλιογραφικών αναφορών:
246
Αριθμός σελίδων:
vii, 153

document.pdf
4 MB
Δεν επιτρέπεται η πρόσβαση στο αρχείο. H πρόσβαση επιτρέπεται μόνο εντός του δικτύου του ΕΚΠΑ.