Μονάδα:
Διατμηματικό / Διϊδρυτικό ΠΜΣ Μοριακή ΙατρικήΒιβλιοθήκη Επιστημών Υγείας
Ημερομηνία κατάθεσης:
2012-07-03
Συγγραφέας:
Καπαρέλου Μαρία
Στοιχεία επιβλεπόντων καθηγητών:
Καθηγητής Μ.Κουτσιλιέρης, Αν. Καθηγητής Χ.Κόνσολας, Λέκτορας Α. Αρμακόλας
Πρωτότυπος Τίτλος:
In vitro παραγωγή πεπτιδίου Ε (ενεργό μέρος IGF1-Ec) σε E.coli
Γλώσσες εργασίας:
Ελληνικά
Περίληψη:
Ο σκοπός της μελέτης αυτής είναι η in-vitro παραγωγή πεπτιδίου E (τo ενεργό
τμήμα του ΙGF-Εc) σε E.Coli, αποβλέποντας: Στην παραγωγή του πεπτιδίου Ε του
IGF1-Ec και στον καθορισμό των βιολογικών δρόμων που συνδέονται με την δράση
του IGF-Ec αφού ο pT7-FLAG-MAT-Tag 2 expression vector προσδίδει στο πεπτίδιο
Ε, το οποίο εισάγεται σε αυτόν, πρωτεϊνική αλληλουχία η οποία αλληλεπιδρά με
μεταλλικά ιόντα. Έτσι το πρωτεϊνικό προϊόν του expression vector αυτού θα
μπορέσει να κατακρατηθεί από Νι+ columns , πριν και μετά από αλληλεπίδραση με
ενδοκυττάριες και μεμβρανικές πρωτεΐνες.
Αρχικά έγινε σύνθεση του τμήματος DNA που οδηγεί στην παραγωγή του πεπτιδίου Ε
του IGF-1Ec. Από μυϊκό ιστό που έχει αποδειχθεί ότι εκφράζει τον IGF-Ec
γίνεται απομόνωση RNA, στη συνέχεια RT και μετά PCR με επιλεγμένους primers
στους οποίους έχουν εισαχθεί και σημεία για περιοριστικές ενδονουκλεάσες. Έγινε
εισαγωγή του RT-PCR προϊόντος στον expression vector και στην συνέχεια εισαγωγή
του σε Ε-coli BL21 (expression strain) το οποίο θα επιτρέψει την έκφραση του
τμήματος που έχει εισαχθεί στον expression vector. Η επαγωγή της έκφρασης ήταν
επιτυχής και με την βοήθεια του Coomassie και με ανοσοαποτύπωμα Western έγινε
διάκριση της πρωτεΐνης.
Λέξεις-κλειδιά:
Βακτήρια , Κλωνοποίηση, Μεταλλικά ιόντα, Επαγωγή έκφρασης , Πλασμίδιο
Αρ. σελίδων ευρετηρίου:
0
Αρ. βιβλιογραφικών αναφορών:
75
Αρχείο:
Δεν επιτρέπεται η πρόσβαση στο αρχείο.
document.pdf
946 KB
Δεν επιτρέπεται η πρόσβαση στο αρχείο.
