Μονάδα:
Διατμηματικό / Διϊδρυτικό ΠΜΣ Μοριακή ΙατρικήΒιβλιοθήκη Επιστημών Υγείας
Ημερομηνία κατάθεσης:
2016-04-18
Συγγραφέας:
Λεάνδρου Εμμανουέλα
Στοιχεία επιβλεπόντων καθηγητών:
Λεωνίδας Στεφανής, Κώστας Βεκρέλλης, Σπύρος Ευθυμιόπουλος
Πρωτότυπος Τίτλος:
Novel approaches to purify and measure the activity of dimeric and monomeric LRRK2
Γλώσσες εργασίας:
Αγγλικά
Μεταφρασμένος τίτλος:
Απομόνωση και μέτρηση της ενεργότητας μονομερούς και διμερούς LRRK2
Περίληψη:
Η LRRK2 είναι μια πρωτεϊνική κινάση που ανήκει στην οικογένεια των ROCO
πρωτεϊνών. Έχει δειχθεί ότι, συγκεκριμένες μεταλλάξεις στο γονίδιο της LRRK2
οφείλονται για την εμφάνιση της νόσου του Πάρκινσον, ενώ έχει προταθεί ότι, η
LRRK2 σχηματίζει τόσο μονομερείς, όσο και διμερείς μορφές. Μέχρι σήμερα, οι
τεχνικές που έχουν χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση των ολιγομερών της LRRK2
βασίζονται στο μοριακό μέγεθος (size-exclusion chromatography, native
blue-PAGE) ή σε in vitro πειράματα. Οι τεχνικές αυτές, όμως, δεν μπορούν να
διαχωρίσουν ανάμεσα σε ολιγομερείς μορφές της LRRK2 και σε μονομερείς μορφές
που έχουν προσδεθεί σε ένα πρωτεϊνικό σύμπλοκο. Η παρούσα μελέτη, συνδυάζει μια
τεχνική που βασίζεται στην βιοτινυλίωση μορίων που βρίσκονται σε κοντινή
απόσταση (proximity biotinylation assay) με μια τεχνική που επιτρέπει την
μέτρηση ενεργότητας κινάσης. Η πρώτη τεχνική επιτρέπει την ανίχνευση και
απομόνωση διμερών ή ολιγομερών της LRRK2, ύστερα από τον σχηματισμό τους μέσα
στα κύτταρα. Έτσι, τα ολιγομερή σχηματίζονται στο φυσικό τους περιβάλλον όπου
δεν επηρεάζεται η στερεοδομή της πρωτεΐνης. Διάφορες μεταλλάξεις της LRRK2
έχουν συνδεθεί με αυξημένη κυτταροτοξικότητα και η τοξικότητα αυτή φαίνεται να
συνδέεται με την ενεργότητα κινάσης της πρωτεΐνης. Επομένως, η εξακρίβωση
πιθανών διαφορών της ενεργότητας κινάσης μεταξύ των διαφορετικών μορφών της
LRRK2 μπορεί να οδηγήσει στην παραγωγή αναστολέων που στοχεύουν ειδικά την
παθογενή μορφή της LRRK2. Κατ’ αυτόν τον τρόπο, θα κατασταλλεί μόνο η
ενεργότητα κινάσης που πιθανά οδηγεί σε παθογένεια, χωρίς να επηρεαστούν τα
βασικά επίπεδα ενεργότητας που πιθανώς είναι απαραίτητα για την κυτταρική
επιβίωση.
Λέξεις-κλειδιά:
Νόσος του Πάρκινσον, Πρωτεΐνη LRRK2, Ολιγομερισμός, Ενεργότητα κινάσης, Βιοτινυλίωση εγγύτητας
Αρ. σελίδων ευρετηρίου:
0
Αρ. βιβλιογραφικών αναφορών:
71
Αρχείο:
Δεν επιτρέπεται η πρόσβαση στο αρχείο. H πρόσβαση επιτρέπεται μόνο εντός του δικτύου του ΕΚΠΑ.
document.pdf
2 MB
Δεν επιτρέπεται η πρόσβαση στο αρχείο. H πρόσβαση επιτρέπεται μόνο εντός του δικτύου του ΕΚΠΑ.
