Μονάδα:
Κατεύθυνση ΒιοχημείαΒιβλιοθήκη Σχολής Θετικών Επιστημών
Ημερομηνία κατάθεσης:
2012-10-31
Συγγραφέας:
Σταμόγιαννος Αθανάσιος
Στοιχεία επιβλεπόντων καθηγητών:
Αθανασία Σιαφάκα Καθηγήτρια, Μαίρη Μαυρή-Βαβαγιάννη Αναπληρώτρια Καθηγήτρια, Ντία Γαλανοπούλου Αναπληρώτρια Καθηγήτρια
Πρωτότυπος Τίτλος:
Μελέτη της έκκρισης της λιπάσης των μονοακυλογλυκερολών και της αμιδοϋδρολάσης των λιπαρών οξέων από το πρωτόζωο tetrahymena
Γλώσσες εργασίας:
Ελληνικά
Περίληψη:
Στην παρούσα εργασία μελετήθηκε η έκκριση των κυρίων καταβολικών ενζύμων του
ενδοκανναβινοειδόυς συστήματος, της αμιδοϋδρολάσης των λιπαρών οξέων (FAAH) και
της λιπάσης των μονοακυλογλυκερολών (MAGL) στο πρωτόζωο Tetrahymena
thermophila. Αρχικά, μελετήθηκε η έκκριση των ενζύμων σε μέσο ασιτίας με χρήση
ως υποστρωματος της [3Η]2-ελαϋλογλυκερόλης ([3H]2-OG) και παρουσία ή απουσία
του ειδικού αναστολέα της FAAH AM374. Διαπιστώθηκε η έκκριση και των δύο
ενζύμων σε μέσο ασιτίας, της οποίας η έκταση εξαρτάται από το χρόνο παραμονής
στο μέσο και βρέθηκε ότι η μέγιστη έκκριση ~5% παρατηρείται μετά από 4 ώρες
επώασης. Στη συνέχεια, μελετήθηκε η έκκριση των δύο ενζύμων από τις
βλεννοκύστεις της Tetrahymena, ύστερα από διέγερση της εξωκύτωσης τους με
διβουκαΐνη. Στη βλέννα που απομονώθηκε ανιχνεύτηκαν δραστικότητες MAGL και
FAAH, με χρήση ως υποστρώματος [3H]2-OG και παρουσία ή απουσία του αναστολέα
ΑΜ374, ή του ειδικού αναστολέα της MAGL JZL184. Μάλιστα, στη περίπτωση της MAGL
η δραστικότητα της βλέννας ήταν παρόμοια με αυτή του ομογενοποιήματος των
κυττάρων. Η χρήση της ανοσοαποτύπωσης με αντίσωμα έναντι MAGL αποκάλυψε την
ύπαρξη μίας ανοσοδραστικής πρωτεΐνης στα ~45 kDa στο κλάσμα της βλέννας, καθώς
και στο υπερκείμενο και το ομογενοποίημα. Τέλος, η συνεστιακή μικροσκοπία
ανοσοφθορισμού έδειξε τον περικυτταρικό εντοπισμό της MAGL, συμβάλλοντας στις
ενδείξεις για παρουσία της στις βλεννοκύστεις.
Λέξεις-κλειδιά:
MAGL, FAAH, Tetrahymena, Έκκριση λυσοσωμάτων, Έκκριση βλεννοκυστών
Αρ. σελίδων ευρετηρίου:
1-7
Αρ. βιβλιογραφικών αναφορών:
114
