Μονάδα:
Κατεύθυνση Κλινική Βιοχημεία - Μοριακή ΔιαγνωστικήΒιβλιοθήκη Σχολής Θετικών Επιστημών
Ημερομηνία κατάθεσης:
2024-06-05
Συγγραφέας:
Ουγιαρίδης Κωνσταντίνος-Παναγιώτης
Στοιχεία επιβλεπόντων καθηγητών:
Σίδερης Διαμάντης, Καθηγητής, Τμήμα Βιολογίας, ΕΚΠΑ
Πρωτότυπος Τίτλος:
«Μελέτη του ρόλου της RNase Κ v14 σε μηχανισμούς απόπτωσης επαγώμενους από οξειδωτικό stress»
Γλώσσες εργασίας:
Ελληνικά
Μεταφρασμένος τίτλος:
Μελέτη του ρόλου της RNase Κ v14 σε μηχανισμούς απόπτωσης επαγώμενους από οξειδωτικό stress
Περίληψη:
Το οξειδωτικό στρες ορίζετε ως η ανισορροπία μεταξύ της παραγωγής ενεργών ειδών οξυγόνου και της αντιοξειδωτικής άμυνας και συμβάλλει σημαντικά σε διάφορες παθοφυσιολογικές διεργασίες. Η κυτταρική απόκριση στο στρες περιλαμβάνει μια μάχη μεταξύ επιβίωσης ή κυτταρικού θανάτου όταν η βλάβη είναι σοβαρή. Οι ριβονουκλεάσες είναι βασικά ένζυμα που εμπλέκονται στο μεταβολισμό του RNA, ένα από τα κρίσιμα βήματα στον έλεγχο της έκφρασης των γονιδίων και ως εκ τούτου στον έλεγχο της μοίρας των κυττάρων. Διάφορες μελέτες έχουν επισημάνει τον ρόλο αυτών των ενζύμων σε στρεσογόνες καταστάσεις, όπου ρυθμίζουν την κυτταρική απόκριση μέσω της αποικοδόμησης ορισμένων ειδών RNA. Η ριβονουκλεάση Κ ανήκει στην κατηγορία των ενδοριβονουκλεασών και σε επίπεδο mRNA εκφράζεται σε όλους τους ιστούς και σε όλα τα αναπτυξιακά στάδια. Η RNASEK εντοπίζεται στην κυτταρική επιφάνεια και στα ενδοσώματα, ενώ ο βιολογικός του ρόλος είναι ακόμα άγνωστος, φαίνεται να συμμετέχει στη λειτουργία της αντλίας πρωτονίων (V-ATPase), στην ενδοκυττάρωση των ιών, στην παραγωγή piwi-RNAs ενώ επίσης εμπλέκεται στη διαδικασία της απόπτωσης και είναι ένας πιθανός καρκινικός βιοδείκτης.
Σκοπός της παρούσας μεταπτυχιακής διατριβής είναι να μελετήσει τα επίπεδα έκφρασης του εναλλακτικού μεταγράφου 14 του γονιδίου RNASEK σε ανθρώπινες κυτταρικές σειρές υπό την επίδραση οξειδωτικών παραγόντων. Για το σκοπό αυτό, τα κύτταρα HEK293T, MCF7 και HTB9 καλλιεργήθηκαν σε αυξανόμενες συγκεντρώσεις H2O2 και του αναστολέα πρωτεασώματος, Carfilzomib (CFZ) για διάφορες περιόδους επώασης και τα ποσοστά κυτταροτοξικότητας και απόπτωσης προσδιορίστηκαν με την τεχνική αποκλεισμού Trypan Blue και τη δοκιμή διφαινυλαμίνης, αντίστοιχα. Μετά την επιβεβαίωση της επαγωγής κυτταρικού και αποπτωτικού θανάτου από οξειδωτικό στρες, η έκφραση των μεταγραφών μελετήθηκε με αντιδράσεις σε πραγματικό χρόνο qPCR, χρησιμοποιώντας φθορίζουσα χρωστική SYBR Green I, μετά από απομόνωση RNA και δημιουργία cDNA από 160 δείγματα κυττάρων. Τα αποτελέσματα στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε στατιστική επεξεργασία για να συσχετιστούν τα επίπεδα έκφρασης με παράγοντες. Τα αποτελέσματα της στατιστικής ανάλυσης δείχνουν ότι τα επίπεδα έκφρασης του μεταγραφήματος 14 αυξάνονται (8-15 φορές) σε συγκεκριμένες συγκεντρώσεις για τις περιόδους επώασης H2O2 16, 24 και 48 ωρών. Το γεγονός ότι το αντίγραφο 14 έχει χαμηλά επίπεδα έκφρασης υπό κανονικές συνθήκες, η αύξησή του υπό την επίδραση οξειδωτικού στρες, που οδηγεί το κύτταρο σε νεκρωτικό ή/και αποπτωτικό θάνατο, υποδηλώνει τη συμμετοχή του σε αυτές τις διαδικασίες. Συμπερασματικά, φαίνεται ότι η διαδικασία του εναλλακτικού ματίσματος παράγει μεταγραφές ενός γονιδίου με διαφορετικές ιδιότητες, που μπορεί να είναι κωδικοποιημένες ή όχι και να παίζουν σημαντικούς ρόλους στη λειτουργία των κυττάρων, που αξίζει να χαρακτηριστούν.
Κύρια θεματική κατηγορία:
Θετικές Επιστήμες
Λέξεις-κλειδιά:
Μοριακή Βιολογία, ριβονουκλεάσες, οξειδωτικό stress, Ριβονουκλεάση Κ , υπεροξείδιο υδρογόνου
Αρ. σελίδων ευρετηρίου:
2
Αρ. βιβλιογραφικών αναφορών:
93
Αρχείο:
Δεν επιτρέπεται η πρόσβαση στο αρχείο έως 2025-06-07.
MASTER THESIS.pdf
38 MB
Δεν επιτρέπεται η πρόσβαση στο αρχείο έως 2025-06-07.
