Τμήμα Ιατρικής
Βιβλιοθήκη Επιστημών Υγείας

2021-12-30

2021

Μαρίνου Διονυσία

Τσακρής Αθανάσιος, Καθηγητής, Ιατρική Σχολή ΕΚΠΑ
Καψιμάλη – Βαϊοπούλου Βιολέττα, Καθηγήτρια, Ιατρική Σχολή, ΕΚΠΑ
Βρυώνη Γεωργία, Καθηγήτρια, Ιατρική Σχολή, ΕΚΠΑ
Ρούτσιας Ιωάννης, Αναπληρωτής Καθηγητής, Ιατρική Σχολή, ΕΚΠΑ, Επιβλέπων
Αναστασοπούλου Κλειώ, Αναπληρώτρια Καθηγήτρια, Ιατρική Σχολή, ΕΚΠΑ
Μπουφίδου Φωτεινή, Αναπληρώτρια Καθηγήτρια, Ιατρική Σχολή, ΕΚΠΑ
Κουμάκη Βασιλική, Επίκουρη Καθηγήτρια, Ιατρική Σχολή, ΕΚΠΑ

Μελέτη των ριβονουκλεοπρωτεϊνικών συμπλόκων vaults σε φλεγμονώδεις παθήσεις

Ελληνικά

Μελέτη των ριβονουκλεοπρωτεϊνικών συμπλόκων vaults σε φλεγμονώδεις παθήσεις

Τα vaults είναι οι μεγαλύτερες ριβονουκλεοπρωτεΐνες που έχουν περιγραφεί έως σήμερα στο εσωτερικό των ευκαρυωτικών κυττάρων, με μάζα 13ΜDa. Το μεγάλο τους μέγεθος, τους δίνει την δυνατότητα να ενδοθυλακώνουν πολλές πρωτεΐνες και RNAs του κυττάρου. Τα vaults αποτελούνται από την κύρια vault πρωτεΐνη (MVP), δυο μικρότερες πρωτεΐνες την VPARP και την TEP1, καθώς και από μόρια RNA. Τα σωματίδια αυτά έχουν την ικανότητα, σε όξινο pH, να διαχωρίζονται σε δυο συμμετρικά κομμάτια τα οποία μπορούν να επανασυρμολογηθούν. Σύμφωνα με επιστημονικές δημοσιεύσεις, τα vaults σχετίζονται με το φαινόμενο αντίστασης στην χημειοθεραπεία και διαδραματίζουν ρόλο στην διαδικασία της φλεγμονώδους αντίδρασης. Επιπρόσθετα, αποδίδεται σε αυτά τα σωματίδια κάποιος ρόλος και στις περιπτώσεις των ρευματικών νοσημάτων. Στην παρούσα διδακτορική διατριβή, στόχος ήταν η μελέτη των vaults σωματιδίων και των συστατικών τους σε φλεγμονώδη νοσήματα. Για το σκοπό αυτό, τα επίπεδα των vaults αναλύθηκαν σε ασθενείς και σε υγιή άτομα. Η MVP αποτελεί >70% της συνολικής μάζας των vaults σωματιδίων. Με βάση, λοιπόν, την γνωστή τρισδιάστατη δομή των vaults σωματιδίων του αρουραίου, σχεδιάστηκαν δυο πιθανοί επίτοποι της MVP και χρησιμοποιήθηκαν για την παραγωγή αντισωμάτων σε δύο διαφορετικά πειραματόζωα. Τα αντισώματα αυτά, εν συνεχεία, χρησιμοποιήθηκαν για την ανάπτυξη μιας sandwich ELISA, που αποσκοπούσε στην ποσοτικοποίηση της MVP. Προκειμένου να αυξηθεί η ευαισθησία της μεθόδου, ενσωματώθηκε και ένα σύστημα ενίσχυσης της ELISA (ELISA Amplification System). Τα πεπτίδια που παρήχθησαν, χρησιμοποιήθηκαν περαιτέρω και για την ανάπτυξη μεθόδου ανίχνευσης αυτοαντισωμάτων έναντι της MVP, στον ορό του αίματος. Επιπρόσθετα, στην παρούσα μελέτη διερευνήθηκε η πιθανότητα τα vaults να απελευθερώνονται στον ορό του αίματος, αφού έχουν ενδοθυλακώσει μόρια από την περιοχή της φλεγμονής. Για τον σκοπό αυτό, επιχειρήθηκε η ανίχνευση του vault RNA, με την μέθοδο της PCR, στον ορό του αίματος, καθώς και η ανοσοκατακρήμνιση των vaults με την χρήση μαγνητικών σφαιριδίων ή υπερφυγοκέντρησης σε διάλυμα γραμμικά διαβαθμισμένης συγκέντρωσης σουκρόζης. Τα αποτελέσματά μας κατέδειξαν, ότι η MVP είναι αυξημένη στον ορό του αίματος ασθενών με PA και EΡΑ. Έτσι, λοιπόν, η MVP θα μπορούσε να αποτελέσει έναν νέο βιοδείκτη για την διάγνωση της ΡΑ. Η MVP, μάλιστα, συνδυαστικά με άλλους βιοδείκτες που χρησιμοποιούνται ευρέως στην κλινική πράξη (όπως anti-CCP και RF), μπορεί να αυξήσει την διαγνωστική ακρίβεια στην περίπτωση της ΡΑ και της ΕΡΑ. Εν συνεχεία, εξετάστηκε εάν η MVP σχετίζεται με τον είδος της θεραπείας που χορηγείται στους ασθενείς με ΡΑ. Διαπιστώθηκε ότι ένας ασθενής με υψηλά επίπεδα MVP είναι πιο πιθανό να μην ανταποκριθεί θετικά στην θεραπεία, από ότι ένας ασθενής με χαμηλά επίπεδα MVP. Επιπρόσθετα, τα επίπεδα της MVP βρέθηκαν υψηλά σε ασθενείς με φλεγμονή, συγκριτικά με τα υγιή άτομα. Ιδιαίτερο ενδιαφέρον παρουσίασε η ανίχνευση αυτοαντισωμάτων σε ασθενείς με αυτοάνοσα νοσήματα (ΡΑ, σύνδρομο Sjögren). Τέλος, μετά από μοριακή ανάλυση στους ορούς ασθενών και υγιών ατόμων, καθώς και προσπάθεια κατακρήμνισης των vaults από τους συγκεκριμένους ορούς, διαπιστώθηκε ότι τα vaults πιθανά δεν κυκλοφορούν στον ορό του αίματος.

Επιστήμες Υγείας

Vaults, MVP, Φλεγμονή, ΡΑ

Όχι

0

Ναι

161

182

Δεν επιτρέπεται η πρόσβαση στο αρχείο. H πρόσβαση επιτρέπεται μόνο εντός του δικτύου του ΕΚΠΑ.

https://pergamos.lib.uoa.gr/uoa/dl/object/2969731