Στοιχεία επιβλεπόντων καθηγητών:
Μαριάννα Αντωνέλου, Επίκουρη Καθηγήτρια, Τμήμα Βιολογίας, ΕΚΠΑ
Περίληψη:
Σκοπός: Τα μυελοδυσπλαστικά/μυελουπερπλαστικά νεοπλάσματα (ΜΔΣ/ΜΥΝ) είναι μυελικές νεοπλασίες στις οποίες παρατηρούνται χαρακτηριστικά τόσο των μυελοδυσπλαστικών (ΜΔΣ), όσο και των μυελοϋπερπλαστικών νεοπλασμάτων (ΜΥΝ). Σε μεγάλο ποσοστό των ασθενών συχνά ανιχνεύονται σημειακές ή άλλες μεταλλάξεις μικρής κλίμακας σε γονίδια που συμμετέχουν στην κυτταρική σηματοδότηση, στη ρύθμιση του επιγενετικού μηχανισμού του κυττάρου (TET2 και IDH1/2), στην ωρίμανση του RNA (SRSF2, SF3B1, U2AF1). Μάλιστα, οι τελευταίες δεν είναι αποκλειστικές, αλλά μπορεί να συνοδεύονται από μεταλλάξεις DNMT3, JAK2, ASXL1 και TET2. Σκοπός της παρούσας Διπλωματικής Εργασίας ήταν η κατά προσέγγιση εκτίμηση της μεθυλίωσης του γονιδιώματος μέσω ανάλυσης των ρετρομεταθετών στοιχείων LINE-1, τα οποία απαντώνται διάσπαρτα στο γονιδίωμα, με την τεχνική post Real-time PCR HRMΑ σε δείγματα από ασθενείς με ΜΔΣ/ΜΥΝ.
Υλικά και Μέθοδοι: Σε αυτή την εργασία χαρακτηρίστηκαν 60 ασθενείς με βάσει τα κριτήρια του WHO 2016 για τα ΜΔΣ/ΜΥΝ και σύμφωνα με το μοριακό τους προφίλ, επιλέχθηκαν 15 ασθενείς κατά τη διάγνωση. Για τον προσδιορισμό της κατάστασης μεθυλίωσης των LINE-1, για τις αναλύσεις του πρότυπου της καμπύλης τήξης, χρησιμοποιήθηκαν ¬6 δείγματα DNΑ ατόμων χωρίς αιματολογικές διαταραχές. Για το σκοπό αυτό χρησιμοποιήθηκε η μέθοδος MS-HRMA και η μέθοδος MSP για την επαλήθευση των δεδομένων.
Αποτελέσματα: Τα μεταθετά στοιχεία LINE-1, των ασθενών με ΜΔΣ/ΜΥΝ εμφανίζουν στατιστικώς σημαντικά (p-value=0.0071), αυξημένα επίπεδα μεθυλίωσης (88.47%), συγκριτικά με τα αντίστοιχα επίπεδα στα άτομα του φυσιολογικού πληθυσμού (85.81%). Επιπλέον, τα μεταθετά στοιχεία LINE-1, των ασθενών με ΜΔΣ/ΜΥΝ, που έχουν μετάλλαξη στο γονίδιο DNMT3A, εμφανίζουν στατιστικώς σημαντικά (p-value=0.0322), μειωμένα επίπεδα μεθυλίωσης (86.77%), συγκριτικά με τα αντίστοιχα επίπεδα στους ασθενείς με μετάλλαξη σε άλλο γονίδιο (88.73%). Τα αποτελέσματα επαληθεύτηκαν με τη μέθοδο MSP.
Συμπεράσματα: Στην παρούσα εργασία, παρατηρήθηκε στατιστικώς σημαντική διαφορά των επιπέδων μεθυλίωσης (p-value=0.0036) των ασθενών (έχουν παραληφθεί αυτοί με μετάλλαξη στο γονίδιο DNMT3A), σε σχέση με τα άτομα του φυσιολογικού πληθυσμού. Τα αποτελέσματα της παρούσας εργασίας υποδηλώνουν ότι είναι απαραίτητο να διεξαχθούν περαιτέρω μελέτες, προκειμένου να εξαχθούν ασφαλή συμπεράσματα.
