Μονάδα:
Κατεύθυνση Κοσμητολογία - ΔερματοφαρμακολογίαΒιβλιοθήκη Σχολής Θετικών Επιστημών
Ημερομηνία κατάθεσης:
2017-07-07
Συγγραφέας:
Γραμματικάκη Ντιάνα-Στεφανία
Στοιχεία επιβλεπόντων καθηγητών:
Λιβανίου Ευαγγελία, Ερευνήτρια Α΄, ΙΠΡΕΤΕΑ, ΕΚΕΦΕ «Δημόκριτος»
Κλέτσας Δημήτριος, Ερευνητής Α΄ - Διευθυντής ΙΒΕ, ΕΚΕΦΕ «Δημόκριτος»
Πρωτότυπος Τίτλος:
Πεπτίδια με πιθανή επουλωτική δράση
Γλώσσες εργασίας:
Ελληνικά
Μεταφρασμένος τίτλος:
Πεπτίδια με πιθανή επουλωτική δράση
Περίληψη:
Αντικείμενο της παρούσας εργασίας ήταν, αρχικά, η εργαστηριακή σύνθεση, ο καθαρισμός και ο αναλυτικός χαρακτηρισμός (ταυτοποίηση) των πεπτιδίων acetylSer-Asp-Lys-Pro-OH (AcSDKP) και acetylAla-Asp-Lys-Pro-OH (AcADKP), με άμεσο στόχο την παράλληλη in vitro βιολογική τους αξιολόγηση σε συστήματα κυττάρων που σχετίζονται με το φαινόμενο της επούλωσης δερματικών πληγών. Τα πεπτίδια AcSDKP και AcADKP αποτελούν τα αμινοτελικά τετραπεπτίδια δύο μεγαλύτερων βιοδραστικών πεπτιδίων, των 43-πεπτιδίων θυμοσίνη β4 (Τβ4) και θυμοσίνη β10 (Τβ10), αντίστοιχα, που ανήκουν σε μία ευρύτερη οικογένεια ενδογενών πεπτιδίων, τις β-θυμοσίνες. Η Τβ4 και η Τβ10, που παρουσιάζουν υψηλή δομική ομολογία, εκφράζονται σε όλα σχεδόν τα ανθρώπινα κύτταρα και η βιολογική δράση τους φαίνεται ότι είναι σημαντική. Σύμφωνα με στοιχεία της βιβλιογραφίας, τόσο η Τβ4 όσο και το τετραπεπτίδιο AcSDKP (που προκύπτει από πρωτεόλυση της Τβ4) έχουν θετική επίδραση στην επούλωση πληγών του δέρματος, ενώ πολύ λιγότερα στοιχεία είναι γνωστά για την επίδραση της Τβ10 (ή τμημάτων της) στο φαινόμενο της επούλωσης.
Η σύνθεση των τετραπεπτιδίων AcSDKP και AcADKP έγινε με την τεχνική της Fmoc-πεπτιδικής σύνθεσης σε στερεά φάση. Ο καθαρισμός των AcSDKP και AcADKP έγινε με ημιπαρασκευαστική RP-HPLC και η καθαρότητα των τελικών προϊόντων ελέγχθηκε με αναλυτική RP-HPLC (στην οποία χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικό πρότυπο εμπορικά διαθέσιμο AcSDKP). Η καθαρότητα των πεπτιδίων ήταν εξαιρετική και η συνολική απόδοση της σύνθεσης (~ 30 %) πολύ ικανοποιητική. Τα καθαρά πεπτίδια ταυτοποιήθηκαν με φασματομετρία μαζών με τη μέθοδο του ιοντισμού με ηλεκτροψεκασμό (ESI-MS)
Η in vitro βιολογική αξιολόγηση των AcSDKP και AcADKP έγινε ως εξής: Αρχικά, ελέγχθηκε η πιθανή κυτταροτοξική δράση των AcSDKP και AcADKP σε ανθρώπινους δερματικούς ινοβλάστες (AG01523c) και κερατινοκύτταρα (HaCaT), με τη δοκιμασία MTT (κατά την οποία χρησιμοποιήθηκε επίσης, ως πρότυπο, εμπορικά διαθέσιμο AcSDKP), καθώς και η επίδρασή τους στον πολλαπλασιασμό των δερματικών ινοβλαστών, μέσω του ποσοτικού προσδιορισμού της σύνθεσης DNA με τη μέθοδο τριτιωμένης θυμιδίνης. Στη συνέχεια, ελέγχθηκε η επίδραση των τετραπεπτιδίων AcSDKP και AcADKP στη σύνθεση κολλαγόνου από τους δερματικούς ινοβλάστες με τη μέθοδο της τριτιωμένης προλίνης καθώς και η επίδρασή τους στη μετανάστευση των κερατινοκυττάρων, μέσω της δοκιμασίας κυτταρικής μετανάστευσης με σχηματισμό τομής (scratch assay). Οι παραπάνω in vitro κυτταρικές δοκιμασίες δεν έδειξαν στατιστικά σημαντική επίδραση των τετραπεπτιδίων AcSDKP και AcADKP στις υπό μελέτη βιολογικές παραμέτρους, τουλάχιστον υπό τις πειραματικές συνθήκες που ακολουθήθηκαν. Ωστόσο, από τα πειραματικά αποτελέσματα της παρούσας εργασίας προκύπτει ότι τα τετραπεπτίδια AcSDKP και AcADKP μπορούν να παρασκευασθούν στο εργαστήριο, σε ικανές ποσότητες (της τάξης των mg) και σε υψηλή καθαρότητα, ακολουθώντας συγκεκριμένα πρωτόκολλα σύνθεσης και καθαρισμού. Τα πεπτίδια αυτά δεν είναι τοξικά (σε συγκεντρώσεις από 10-10 έως 10-7 Μ), όταν επωάζονται με τους δερματικούς ινοβλάστες ή τα κερατινοκύτταρα. Τα παραπάνω πεπτίδια μπορούν να παρασκευασθούν στο εργαστήριο και να χρησιμοποιηθούν σε επιλεγμένες βιολογικές δοκιμασίες, με στόχο την περαιτέρω μελέτη της επίδρασής τους στο φαινόμενο της επούλωσης πληγών του δέρματος.
Κύρια θεματική κατηγορία:
Θετικές Επιστήμες
Λοιπές θεματικές κατηγορίες:
Φαρμακευτική τεχνολογία
Λέξεις-κλειδιά:
Πεπτίδια, δερματική επούλωση, θυμοσίνες, β-θυμοσίνες, acSDKP, acADKP, πεπτιδική σύνθεση στερεάς φάσης, κερατινοκύτταρα, δερματικοί ινοβλάστες
Αρ. σελίδων ευρετηρίου:
0
Αρ. βιβλιογραφικών αναφορών:
71
